EN
Перекрестное загрязнение является одной из самых стойких и дорогостоящих проблем в лабораторной работе, и планшеты для анализов являются одними из наиболее уязвимых инструментов в любом рабочем процессе в области наук о жизни. Независимо от того, проводите ли вы скрининг лекарственных средств с высокой пропускной способностью, анализы жизнеспособности клеток или стандартные протоколы культивирования клеток, даже незначительное загрязнение может поставить под угрозу весь эксперимент. Понимание того, как предотвратить перекрестное загрязнение в планшетах с лунками, не является опциональным — это фундаментальное требование для получения воспроизводимых и достоверных результатов.
Скважины предназначены для одновременной обработки нескольких образцов в изолированных скважинах, но физическое разделение не гарантирует автоматической биологической или химической изоляции. Миграция аэрозолей, неправильная техника пипетирования, неадекватное уплотнение и плохая гигиена лаборатории могут позволить загрязнителям перемещаться между колодцами. В этой статье даны практические советы, которые исследователи и лабораторные специалисты могут применить немедленно, чтобы уменьшить перекрестное загрязнение в скважинах и улучшить целостность каждого эксперимента.
Процедуры пипетирования, которые защищают целостность колодца
Как выбрать правильные пипетные концы для колодцев
Одним из самых прямых путей перекрестного загрязнения скважинной плиты является кончик пипеты. Использование нефильтрованных или некачественных кончиков значительно увеличивает риск передачи аэрозоля между скважинами. Фильтрованные кончики пипеты создают физический барьер, который предотвращает возвращение жидкости в бочку пипеты, уменьшая вероятность того, что остаточный образец из одной скважины загрязняет другую. Всегда выбирайте кончики, которые совместимы с геометрией ваших скважинных плит, особенно при работе с 96-скважинными плитами или форматами с более высокой плотностью, где расстояние между скважинами минимально.
Смена наконечников между каждой лункой — еще одна обязательная практика при работе с планшетами для культур клеток. Даже при работе с образцами, которые кажутся идентичными, биологические различия или следы химических остатков могут привести к ошибкам, если один и тот же наконечник используется повторно. Введение строгого правила «один наконечник на одну лунку» для всех членов команды помогает обеспечить надежность данных, получаемых с планшетов для культур клеток любого формата — от 6-луночных до 384-луночных.
Угол и скорость дозирования в лунки планшетов
Угол, под которым пипетка удерживается над планшетами с лунками, имеет большее значение, чем полагают многие исследователи. Слишком резкое наклонение пипетки или дозирование жидкости на высокой скорости может вызвать брызги, приводящие к попаданию материала из одной лунки в соседние. Обычно рекомендуется медленное и контролируемое дозирование под углом примерно 45 градусов, чтобы свести к минимуму риск перекрестного загрязнения за счёт брызг в планшетах с лунками. Обучение всего лабораторного персонала правильной технике пипетирования (поза и скорость) при работе с планшетами с лунками должно входить в стандартную процедуру адаптации новых сотрудников и периодических проверок качества.
Методы герметизации и хранения планшетов с лунками
Использование подходящих герметизирующих плёнок для планшетов с лунками
Правильное герметичное закрытие — критически важный этап, который часто упускают из виду при работе с планшетами для анализов. Негерметично закрытые или плохо закрытые планшеты подвергаются воздействию воздушных частиц, летучих соединений от соседних реагентов и окружающей влажности — всё это может нарушить целостность образцов. Самоклеящиеся герметизирующие пленки, специально разработанные для планшетов для анализов, обеспечивают плотный барьер по каждому лунку, предотвращающий испарение и проникновение аэрозолей. Для применений, связанных с ПЦР или флуоресцентными анализами, оптические герметизирующие пленки сохраняют прозрачность и одновременно защищают планшеты для анализов от загрязнения.
При штабелировании планшетов с лунками во время хранения или инкубации всегда убедитесь, что каждый планшет полностью запечатан перед штабелированием. Штабелирование незапечатанных планшетов с лунками друг на друге создает путь для переноса жидкости с нижней поверхности одного планшета в лунки планшета, расположенного ниже. Использование специальных крышек для планшетов или термоуплотняющих пленок значительно снижает этот риск и обеспечивает сохранение разделения образцов во всех планшетах с лунками при хранении.
Контроль температуры и окружающей среды для планшетов с лунками
Экологические условия напрямую влияют на риск перекрестного загрязнения в лунках планшетов. Инкубаторы и зоны хранения, поддерживающие стабильную температуру и влажность, снижают вероятность образования конденсата на планшетах, что может вызвать перемещение жидкости между лунками. Размещение планшетов на ровных, вибрационно-устойчивых поверхностях также предотвращает пассивное перемещение жидкости. Если планшеты необходимо транспортировать внутри лаборатории, используйте надёжные контейнеры, предотвращающие наклон и перераспределение жидкости во время транспортировки.
Организация рабочего процесса в лаборатории для минимизации загрязнения в лунках планшетов
Организация порядка обработки образцов в лунках планшетов
Способ организации и обработки образцов в лунках планшетов напрямую влияет на риск загрязнения. При работе с несколькими типами образцов за одну сессию обрабатывайте образцы в порядке возрастания их концентрации — от самой низкой к самой высокой. Это простое правило упорядочивания снижает риск того, что образцы с высокой концентрацией загрязнят соседние образцы с более низкой концентрацией в лунках планшетов, где высокая чувствительность детекции может усилить последствия даже следовых количеств перекрестного загрязнения. Назначение выделенных участков лунок планшетов для конкретных категорий образцов — ещё одна эффективная стратегия организации.
Включайте контрольные лунки с отрицательным контролем в каждый набор планшетов с лунками в качестве стандартного инструмента мониторинга загрязнения. Если в отрицательных контролях обнаруживается сигнал, это явный признак того, что перекрестное загрязнение произошло где-то в рабочем процессе, связанном с вашими планшетами с лунками. Регулярное включение контрольных образцов позволяет командам выявлять случаи загрязнения на ранней стадии и проводить расследование их первопричин до того, как они повлияют на крупные серии экспериментов или клинические данные, полученные с использованием планшетов с лунками.
Очистка и дезактивация поверхностей вокруг планшетов с лунками
Рабочая поверхность стола, на которой обрабатываются планшеты с лунками, часто недооценивается как источник загрязнения. Биологические агенты, химические остатки и частицы, накапливающиеся на рабочих поверхностях, могут переноситься на дно или внешний край планшетов с лунками и в конечном итоге попадать в лунки. Протирание рабочей поверхности стола подходящими дезинфицирующими средствами перед каждой процедурой, а также использование одноразовых покрытий для рабочей поверхности, где это практически возможно, создает более чистую зону работы с планшетами с лунками. Ламинарные вытяжные шкафы или биозащитные шкафы обеспечивают дополнительный уровень защиты при работе с особенно чувствительными образцами в планшетах с лунками.
Исследователи также должны регулярно проверять состояние скважинных плит перед использованием. Разрывные, извращенные или неправильно сделанные скважины могут позволить жидкости просачиваться между скважинами из-за структурных дефектов. Выбор высококачественных скважинных пластин с последовательной геометрией скважины, плоским дном и точно вымотанными стенками скважины значительно сокращает пути физического загрязнения. Перед загрузкой любых образцов проверяйте каждый набор скважинных пластинок на наличие видимых дефектов.
Часто задаваемые вопросы
Что вызывает перекрестное загрязнение между скважинами в скважинах?
Кроссозагрязнение в скважинах чаще всего происходит из-за повторного использования кончиков пипеток, образования аэрозолей во время распределения, неправильной герметизации, брызги от агрессивного пипетирования и конденсации из-за плохого контроля окружающей среды. Каждый из этих факторов может перемещать биологический или химический материал из одной скважины в соседние скважины через скважинные пластины любого формата.
Как выбрать подходящие колодец пластинки для снижения риска загрязнения?
Выбирайте планшеты с лунками, изготовленные с соблюдением строгих допусков по размерам и оснащённые чётко очерченными глубокими стенками лунок, препятствующими перекрёстному перемещению жидкости. Планшеты из высококачественного первичного полистирола с однородной поверхностной обработкой снижают вариабельность адсорбции. Для чувствительных анализов планшеты с индивидуальными крышками для каждой лунки или совместимыми герметизирующими плёнками обеспечивают дополнительный барьер против загрязнения во время инкубации и хранения.
Могут ли автоматизированные дозаторы жидкости снизить перекрёстное загрязнение в планшетах с лунками?
Да, автоматизированные системы дозирования жидкости могут значительно снизить перекрёстное загрязнение в планшетах с лунками, вызванное человеческим фактором, за счёт последовательной замены наконечников, контроля скорости дозирования и точного позиционирования над каждой лункой. Однако автоматизация не устраняет все риски: для обеспечения целостности планшетов с лунками, обрабатываемых автоматизированными системами, необходимо корректно настраивать калибровку прибора, использовать качественные наконечники и правильно проектировать расположение элементов на рабочей платформе.