EN
Ristisaastuminen on yksi kestävimmistä ja kustannusvoimaisimmista ongelmista laboratoriotyössä, ja kuppilautaset ovat kaikkein alttiimpia työkaluja missä tahansa elintieteellisessä työnkulussa. Riippumatta siitä, suoritatko korkean läpäisykyvyn lääkeainetutkimuksia, soluneloonkykyä mittaavia testejä tai perussolukulttuuriprotokollia, jopa pienikin saastumistapahtuma voi vaarantaa koko kokeen. Ristisaastumisen estämisen ymmärtäminen kuppilautassa ei ole valinnainen asia – se on perusedellytys toistettavien ja luotettavien tulosten saavuttamiseksi.
Hyvinlevyjä on suunniteltu mahdollistamaan useiden näytteiden samanaikainen käsittely erillisissä kuopissa, mutta tämä fyysinen erottelu ei takaa automaattisesti biologista tai kemiallista erottelua. Aerosolien siirtyminen, virheellinen pipetoimistekniikka, riittämätön tiukentaminen ja huono laboratoriotasapuhdasuus voivat kaikki mahdollistaa kontaminaation leviämisen kuopista toisiin. Tässä artikkelissa esitetään käytännöllisiä ja välittömiä toimenpiteitä, joita tutkijat ja laboratorioteknikot voivat soveltaa heti hyvinlevyjen ristikontaminaation vähentämiseksi ja jokaisen heidän suorittamansa kokeen luotettavuuden parantamiseksi.
Pipetoimistavat, jotka suojaavat hyvinlevyn eheyttä
Oikean pipetin kärkien valinta hyvinlevyille
Yksi suorimmista ristisäilöntätavoista koeputkikasoissa on pipetin kärki. Epäsuodattujen tai alhaiselaatuisien kärkien käyttö lisää merkittävästi aerosolien siirtymisen riskiä koeputkikasojen välillä. Suodatetut pipetinkärjet muodostavat fyysisen esteen, joka estää nesteen palaamasta pipetin runkoon, mikä vähentää sitä mahdollisuutta, että yhden koeputken jäännösaine saastuttaa toista koeputkea. Valitse aina kärjet, jotka ovat yhteensopivia koeputkikasojesi geometrian kanssa, erityisesti silloin, kun työskennellään 96-koeputkikasoilla tai tiukemmassa tiukkuusmuodossa, jossa koeputkien välinen etäisyys on pieni.
Vihjeiden vaihtaminen kaivon välillä on toinen neuvottelutonta käytäntöä kaivon levyn kanssa työskennellessä. Vaikka näytteen käsittelyyn käytettäessä näytettäisiin samankaltaisia, biologiset muutokset tai kemialliset jäännökset voivat aiheuttaa virheen, jos samaa kärkeä käytetään uudelleen. Kaikkien tiimien jäsenten osalta yhden pisteen per kaivo -politiikan vahvistaminen auttaa suojaamaan kaivon levyltä saatujen tietojen luotettavuutta jokaisessa levyn muodossa kuuden kaivojen ja 384 kaivon välillä.
Putkistuksen kulma ja nopeus kaivolevytissä
Pipetin kulma hyvinlevyjen yläpuolella on tärkeämpi kuin monet tutkijat ajattelevat. Liian voimakas pipetin kallistus tai nesteen nopea annostelu voi aiheuttaa roiskumista, joka johtaa aineen siirtymiseen yhdestä lohkosta viereiseen lohkoon. Roiskumisperäisen ristisaastumisen riskin vähentämiseksi suositellaan yleensä hitaata ja hallittua annostelukulmaa noin 45 astetta. Kaikkien laboratoriotyöntekijöiden kouluttaminen oikeasta pipetoimisasennosta ja -nopeudesta hyvinlevyillä tulisi olla osa tavallista perehdytystä ja ajoittaisia laatuarkistoja.
Hyvinlevyjen tiukentaminen ja varastointistrategiat
Sopivien tiukentamiskalvojen käyttö hyvinlevyillä
Oikea tiukka sulje on kriittinen, mutta usein jätetty huomiotta vaihe, kun työskennellään hyvinlevyillä. Tiukentamattomat tai huonosti tiukennetut hyvinlevyt ovat alttiita ilmassa oleville hiukkasille, naapurissa olevien reagenssien haihtuville yhdisteille ja ympäristön kosteudelle – kaikki nämä voivat vaarantaa näytteiden eheyden. Hyvinlevyihin erityisesti suunnitellut liimaavat tiukentamiskalvot tarjoavat tiukan, hyvin kohden eristävän esteen, joka estää haihtumisen ja aerosolien tunkeutumisen. PCR- tai fluoresenssipohjaisten analyysien yhteydessä optiset tiukentamiskalvot säilyttävät läpinäkyvyytensä samalla kun ne suojaavat hyvinlevyjä kontaminaatiolta.
Kun hyvinlevyjä pinotaan varastoinnin tai inkuboimisen aikana, varmista aina, että jokainen levy on täysin tiukennettu ennen pinottavaa käyttöä. Tiukentamattomien hyvinlevyjen pinominen toistensa päälle muodostaa reitin nesteen siirtymiselle ylemmän levyn alapinnalta alempaan levyyn oleviin kuoppiin. Tämän riskin merkittävä vähentäminen ja näytteiden erottelun säilyttäminen kaikissa hyvinlevyissä varastoinnin aikana voidaan saavuttaa käyttämällä erityisiä levykansia tai lämpötiukennettuja kalvoja.
Hyvinlevyjen lämpötila- ja ympäristöolosuhteet
Ympäristöolot vaikuttavat suoraan ristisaastumisen riskiin koeputkissa. Incuboita ja varastointialueita, joissa säilytetään vakaita lämpötila- ja kosteusoloja, käytetään vähentämään kondenssin muodostumista koeputkien pinnalle, mikä voi aiheuttaa nesteen siirtymistä putkien välillä. Koeputkien sijoittaminen tasaiselle, värähtelyltä suojatulle alustalle estää myös nesteen passiivista liikkumista. Jos koeputkia on kuljetettava laboratoriossa, käytä turvallisesti kiinnitettäviä kuljetuslaitteita, jotka estävät kallistumisen ja nesteen uudelleenjakautumisen kuljetuksen aikana.
Laboratoriotyönkulun suunnittelu koeputkien saastumisen vähentämiseksi
Näytteiden käsittelyn järjestyksen järjestäminen koeputkissa
Näytteiden järjestely ja käsittely hyvin levyillä vaikuttaa suoraan saastumisriskiin. Kun useita eri näytetyyppejä käsitellään yhdessä istunnossa, näytteet tulisi käsittelä pienimmästä pitoisuudesta suurimpaan. Tämä yksinkertainen järjestysperiaate vähentää riskiä, että korkeapitoisuusnäytteet saastuttavat alhaisempipitoisuusnäytteitä naapurihyvissä, joissa tunnistustarkkuus voi vahvistaa jopa jäljittävän määrän ristisaastumisen vaikutusta. Toimiva järjestelystrategia on myös varata tiettyihin näytelajeihin omat osiot hyvin levyillä.
Käytä negatiivisia kontrollikoloja jokaisessa kololevyjoukossa tavanomaisena saastumisen seurantatyökaluna. Jos negatiiviset kontrollit antavat signaalin, tämä on selvä merkki siitä, että ristisaastuminen on tapahtunut jossakin kololevyjen käyttöön liittyvässä työnkulussa. Kontrollien säännöllinen käyttö mahdollistaa saastumistapausten varhaisen havaitsemisen ja juurisyyn tutkimisen ennen kuin ne vaikuttavat suuriin kokeiden sarjoihin tai kololevyistä tuotettuun kliiniseen dataan.
Pintojen puhdistus ja desinfiointi kololevyjen ympärillä
Penkkipinnat, joilla käsittelitään hyvinlevyjä, ovat usein aliarvioitu saastumisen lähde. Biologiset aineet, kemialliset jäämät ja pinnalle kertyvät hiukkaset voivat siirtyä hyvinlevyjen pohjaan tai ulkoiseen reunaan ja päätyä lopulta hyviin. Penkkipintojen pyyhkiminen sopivilla desinfiointiaineilla ennen jokaista työistuntoa sekä käytettävien kertakäyttöisten penkkilinnoitteiden käyttö mahdollisuuksien mukaan luovat puhtaamman työalueen hyvinlevyjen käsittelyyn. Laminoidut virtauskaapit tai biosuojakaapit tarjoavat lisäsuojan, kun käsittelitään erityisen herkkiä näytteitä hyvinlevyissä.
Tutkijoiden tulisi myös tarkistaa aina hyvin levyjen kunto ennen käyttöä. Halkeillut, vääntyneet tai huonolaatuisesti valmistetut hyvin levyt voivat mahdollistaa nesteen vuotamisen rakenteellisten puutteiden kautta eri kuoppien välillä. Korkealaatuisten hyvin levyjen valinta – joissa on yhtenäinen kuoppageometria, tasaiset pohjat ja tarkasti muovatut kuoppaseinät – vähentää merkittävästi fyysisiä kontaminaatiopolkuja. Tarkista jokainen hyvin levyjen sarja näkyvistä puutteista ennen näytteiden lisäämistä.
Usein kysytyt kysymykset
Mikä aiheuttaa ristikontaminaation kuoppien välillä hyvin levyissä?
Ristikontaminaatio hyvin levyissä johtuu useimmiten pipettipäiden uudelleenkäytöstä, aerosolien muodostumisesta annostelun aikana, epäasianmukaisesta tiukentamisesta, roiskumisesta liiallisen voimakkaan pipetoimisen yhteydessä sekä kosteuden kondensoitumisesta huonosta ympäristöolosuhteiden hallinnasta. Kaikki nämä tekijät voivat siirtää biologisia tai kemiallisia aineita yhdestä kuopasta naapurikuoppiin kaikenlaisissa hyvin levyissä.
Kuinka valitsen oikeat hyvin levyt kontaminaatioriskin vähentämiseksi?
Valitse hyvin valmistetut koeputkikaset, joiden mitat ovat tarkkoja ja joiden syvät koeputket estävät nesteen vuotamista naapuriputkeen. Korkealaatuisesta, uudesta polystyreenistä valmistetut kasetit, joissa on yhtenäinen pinnankäsittely, vähentävät adsorptiovaihteluita. Herkillä assayeilla koeputkikaset, joissa on erilliset koeputkikannakset tai yhteensopivat tiukentamiskalvot, tarjoavat lisäsuojan saastumiselta inkuboinnin ja säilytyksen aikana.
Voivatko automatisoidut nestekäsittelylaitteet vähentää ristisaastumista koeputkikaseissa?
Kyllä, automatisoidut nestekäsittelyjärjestelmät voivat merkittävästi vähentää ihmisen aiheuttamaa ristisaastumista koeputkikaseissa vaihtamalla pipetin kärjet johdonmukaisesti, säätämällä tarkasti suihkutusnopeutta ja sijoittamalla tarkasti kärjen jokaisen koeputken päälle. Automaatio ei kuitenkaan poista kaikkia riskejä – laitteen kalibrointi, kärkien laatu ja työpöydän asettelu on hallittava huolellisesti, jotta koeputkikasien eheys säilyy automatisoiduissa prosesseissa.