EN
Лабораториялық жұмыстағы ең тұрақты және қымбат тұратын проблемалардың бірі – бір-біріне араласу, және жоғары өткізгіштікпен скрининг жүргізуге арналған ыдыстар олар кез келген өмір ғылымының жұмыс процесіндегі ең әлсіз құралдар болып табылады. Сіз жоғары өнімділікті дәрілерді іріктеу, клеткалық тіршілік белгілерін анықтау немесе стандартты клеткалық мәдениеттің протоколдарын орындасаңыз да, кішігірім ластану оқиғасы тұтас эксперименттің нәтижесін бұзып жіберуі мүмкін. Жақтары бар пластинкалардағы бір-біріне араласуды болдырмау әдістерін түсіну міндетті емес – бұл қайталанатын, сенімді нәтижелер алу үшін негізгі талап.
Жақсы тәртіптегі пластинкалар бірнеше тәжірибелік үлгілерді бөлек орындарда (яғни, ұяшықтарда) бір уақытта өңдеуге мүмкіндік береді, бірақ осы физикалық бөліну автоматты түрде биологиялық немесе химиялық бөлінуін қамтамасыз етпейді. Аэрозольдың көшіп жүруі, дұрыс емес пипеткалау техникасы, жеткіліксіз герметизациялау және зертханадағы тазалықтың нашар деңгейі ұяшықтар арасында ластанушы заттардың таралуына себеп болуы мүмкін. Бұл мақала зерттеушілер мен зертхана техниктеріне ұяшықты пластинкалардағы өзара ластануды азайтуға және өткізілетін әрбір тәжірибенің сенімділігін арттыруға тікелей қолданылатын, тәжірибелік кеңестер береді.
Ұяшықты пластинкалардың бүтіндігін қорғайтын пипеткалау әдістері
Ұяшықты пластинкалар үшін дұрыс пипетка ұштарын таңдау
Жақшалы пластинкалардағы көптеген ластанулардың бірі — пипетка ұшы. Сүзгішсіз немесе төмен сапалы ұштарды қолдану аэрозольдық тасымалдау қаупін әлдеқайда көтереді. Сүзгішті пипетка ұштары сұйықтың пипетканың цилиндрик бөлігіне кері қарай сорылуын болдырмау үшін физикалық кедергі тудырады, ол бір жақшадан қалған үлгінің екінші жақшаға тасымалдану ықтималдығын азайтады. Әрқашан жақшалы пластинкалардың геометриясына сәйкес келетін ұштарды таңдаңыз, әсіресе жақшалар арасындағы қашықтық аз болғанда 96 жақшалы пластинкалар мен одан да жоғары тығыздықтағы форматтармен жұмыс істеген кезде.
Әрбір лунка арасында пипеткалық ұштарды ауыстыру – бұл тақиялы пластинкалармен жұмыс істеген кезде тағы бір міндетті тәжірибе. Тіпті бірдей көрінетін тәжірибелерді өңдеу кезінде де биологиялық әртүрлілік немесе із қалдырған химиялық қалдықтар бір ұшты қайта пайдаланған кезде қателіктерге әкелуі мүмкін. 6-лункалыдан 384-лункалыға дейінгі барлық пластиналық форматтар бойынша тақиялы пластинкалардан алынған деректердің сенімділігін қорғау үшін барлық қызметкерлер арасында қатаң «бір лунка – бір ұш» саясатын енгізу қажет.
Тақиялы пластинкаларда пипеткалау бұрышы мен жылдамдығы
Пипетканың лақтырғыш қалыптарға қандай бұрышпен ұсталуы — көптеген зерттеушілердің түсінгенінен гөрі маңыздырақ. Пипетканы аса күшті етіп еңкейту немесе сұйықты жоғары жылдамдықпен шашу нәтижесінде бір лақтырғыштан көрші лақтырғышқа заттардың шашылуы мүмкін. Шашылуға байланысты араласу қаупін азайту үшін лақтырғыш қалыптарға шашу бұрышын баяу, бақыланатын және шамамен 45 градусқа тең етіп орнату ұсынылады. Лаборатория қызметкерлерінің барлығына лақтырғыш қалыптарға дұрыс пипеткалау ұстанымы мен жылдамдығы бойынша оқыту — қалыпты іске қосу және кезекті сапа бағалауының бір бөлігі болуы тиіс.
Лақтырғыш қалыптардың тығыздалуы мен сақталуы бойынша стратегиялар
Лақтырғыш қалыптарға сәйкес тығыздағыш пленкаларды қолдану
Дұрыс герметизация — бұл әдетте терең ыдыстармен жұмыс істеген кезде ескерілмейтін маңызды қадам. Герметикатталмаған немесе нашар герметикатталған терең ыдыстар ауадағы бөлшектерге, жанындағы реагенттерден буланған заттарға және айналадағы ылғалдылыққа ұшырайды — бұлардың барлығы сынамалардың сапасын төмендетеді. Терең ыдыстарға арналған желімді герметикаттау пленкалары әрбір лунка үшін тығыз кедергі құрып, булануды және аэрозольдың енуін болдырмауға көмектеседі. ПЦР немесе флуоресценттік анализдер сияқты қолданбалар үшін оптикалық герметикаттау пленкалары лунканы ластанудан қорғай отырып, оның шыны тәрізді шығыс қасиетін сақтайды.
Жақшаларды сақтау немесе инкубациялау кезінде әрбір жақшаның толығымен герметикатталғанына әрқашан көз жеткізіңіз. Герметикатталмаған жақшаларды бірінің үстіне бірін қою арқылы төменгі жақшаның төменгі бетіндегі сұйықтың жоғарғы жақшаның ұяшықтарына өтуіне мүмкіндік береді. Арнайы жақша қаптамаларын немесе жылумен герметикатталған пленкаларды қолдану осы қаупті едәуір азайтып, сақтау кезінде барлық жақшалардағы үлгілердің бір-бірінен бөлінуін сақтайды.
Жақшалар үшін температура мен орта факторларын реттеу
Қоршаған орта жағдайлары ыдыстардағы (желілерде) көлденең ластану қаупіне тікелей әсер етеді. Тұрақты температура мен ылғалдылықты сақтайтын инкубаторлар мен сақтау аймақтары ыдыстарда конденсация пайда болу ықтималдығын азайтады, ал бұл сұйықтықтың желілер арасында ығысуына әкелуі мүмкін. Ыдыстарды горизонталь, тербеліссіз бетке орналастыру да сұйықтықтың пассивті ығысуын болдырмауға көмектеседі. Егер ыдыстар зертханада көшірілуі керек болса, олардың көлбеюін және тасымалдау кезінде сұйықтықтың қайта таралуын болдырмайтын сенімді көлік құралдарын қолданыңыз.
Ыдыстардағы ластануды азайту үшін зертхана жұмыс үдерісін жобалау
Ыдыстардағы сынамаларды өңдеу ретін ұйымдастыру
Сынамалардың ұңғыма пластиналары бойынша қалай ұйымдастырылып, өңделуі ластану қаупіне тікелей әсер етеді. Бір сеанста бірнеше үлгі түрлерін өңдеу кезінде ең төменгі концентрациядан ең жоғары концентрацияға дейін үлгілерді өңдеу. Бұл қарапайым реттеу принципі жоғары концентрациялы үлгілердің ұңғыма пластиналарындағы төмен концентрациялы көршілерді ластау қаупін азайтады, онда анықтау сезімталдығы тіпті іздік деңгейдегі шатастыру әсерін күшейте алады. Ұңғыма пластиналарының арнайы бөліктерін нақты үлгілік санаттарға бөлу - тағы бір тиімді ұйымдастыру стратегиясы.
Жақсы тәжірибе ретінде әрбір лақтырғыш табақшалар жиынтығына теріс бақылау лақтырғыштарын қосыңыз — бұл лақтырғыш табақшаларымен жұмыс істеген кезде болуы мүмкін қиылысулы ластануды бақылау құралы ретінде қолданылады. Егер теріс бақылау нәтижелерінде сигнал байқалса, бұл сіздің лақтырғыш табақшаларыңызбен жұмыс істеу процесінің қайда болса да қиылысулы ластану орын алғанын көрсетеді. Бақылау элементтерін рутинды түрде қосу арқылы зерттеу тобы ластану оқиғаларын ерте анықтап, олардың эксперименттердің немесе лақтырғыш табақшаларынан алынған клиникалық деректердің үлкен партияларына әсер етуіне дейін олардың түбірлік себептерін зерттеуге мүмкіндік алады.
Лақтырғыш табақшаларының айналасындағы беттерді тазарту және дезинфекциялау
Жақсы тәртіпте ұстауға арналған қойылымдардың (жасыл тақталардың) қолданылатын орындары – жиі бағаланбаған ластану көзі болып табылады. Биологиялық агенттер, химиялық қалдықтар және жұмыс бетінде жиналатын бөлшектер қойылымдардың табанына немесе сыртқы жиегіне тасылуы мүмкін, содан кейін олар қойылымдардың ұяшықтарына жетеді. Әрбір жұмыс сессиясынан бұрын жұмыс бетін дұрыс дезинфицирлеушілермен сүртіп тазарту және мүмкіндігінше бір рет қолданылатын жұмыс бетінің қаптамаларын пайдалану қойылымдарды ұстау үшін таза жұмыс аймағын қамтамасыз етеді. Ламинарлы ағыс шкафтары немесе биоқауіпсіздік шкафтары қойылымдарда әсіресе сезімтал үлгілермен жұмыс істеген кезде қосымша қорғаныс деңгейін қамтамасыз етеді.
Зерттеушілер қолдануға дейін әдетте жақсы тесіктердің (well plates) күйін реде тексеруі керек. Сынық, бұралған немесе дұрыс емес жасалған тесіктер сұйықтың құрылымдық ақаулар арқылы бір тесіктен екіншісіне сорылуына мүмкіндік береді. Тұрақты тесік геометриясы бар, жазық табанды және дәл пішінделген тесік қабырғалары бар жоғары сапалы тесіктерді таңдау физикалық ластану жолдарын әлдеқайда азайтады. Үлгілерді орналастырмас бұрын әрбір тесіктер жиынтығын көрінетін ақауларға тексеріңіз.
Жиі қойылатын сұрақтар
Тесіктердегі (well plates) тесіктер арасындағы өткізгіштік (cross-contamination) неге байланысты болады?
Тесіктердегі (well plates) өткізгіштік (cross-contamination) негізінен пипетка ұштарын қайта қолдану, сұйықтықты құю кезінде аэрозольдардың пайда болуы, дұрыс емес герметизациялау, қатты пипеттелеу кезіндегі шашырау және орта температурасы мен ылғалдылығын бақылаудың нашар болуынан тұратын конденсация әсерінен туындайды. Бұл факторлардың әрқайсысы биологиялық немесе химиялық заттарды бір тесіктен көршілес тесікке, кез келген форматтағы тесіктерге таратуға мүмкіндік береді.
Ластану қаупін азайту үшін қандай тесіктерді (well plates) таңдау керек?
Сұйықтың бір шағын ыдыстан екіншісіне өтуіне кедергі жасайтын, нақты өлшемдік дәлдікпен жасалған және терең қабырғалы шағын ыдыстарды таңдаңыз. Жоғары сапалы, таза полистиролдан жасалған және беті біркелкі өңделген ыдыстар адсорбциялық айнымалылықты азайтады. Сезімтал анализдер үшін әрбір шағын ыдыстың жеке қапшығы немесе оған сәйкес келетін герметикті пленкалар инкубациялау мен сақтау кезінде ластанудан қосымша қорғау қамтамасыз етеді.
Автоматтандырылған сұйықтық өлшеу құрылғылары шағын ыдыстардағы бір-біріне араласуын азайта ала ма?
Иә, автоматтандырылған сұйықтық өлшеу жүйелері әрбір шағын ыдысқа дәл орналасу, бақыланатын сұйықтық құю жылдамдығы мен тұрақты тиісті шприцтің алмастырылуы арқылы адамның қатесінен туындайтын шағын ыдыстардағы бір-біріне араласуын әлдеқайда азайта алады. Алайда автоматтандыру барлық қауп-қатерлерді жоя алмайды — құрылғының калибрлеуі, шприцтің сапасы мен стендтегі орналасуы қатаң бақылауға алынуы тиіс, сонда ғана автоматтандырылған жүйелермен өңделетін шағын ыдыстардың бүтіндігі қамтамасыз етіледі.