EN
A keresztszennyeződés a laboratóriumi munkában egyik legtartósabb és legdrágább probléma, és jóllemezek a jóllemezek a legérzékenyebb eszközök bármely élettudományos folyamatban. Akár nagy kapacitású gyógyszerképernyőzést, sejtek életképességét vizsgáló teszteket vagy szokásos sejtkultúrás protokollokat hajt végre, akár egy apró szennyeződés is károsíthatja az egész kísérletet. A keresztszennyeződés megelőzésének megértése jóllemezek használata során nem választható – ez alapvető követelmény a reprodukálható, megbízható eredmények eléréséhez.
A kutaklapokat úgy tervezték, hogy egyszeri feldolgozásra engedjenek több mintát elkülönített kutakban, de ez a fizikai elkülönülés nem garantálja automatikusan a biológiai vagy kémiai elszigetelést. Aeroszol-migráció, a pipettázás nem megfelelő technikája, a nem megfelelő lezárás és a laboratóriumi higiénia miatt a szennyező anyagok átjuthatnak a kútok között. Ez a cikk gyakorlati, gyakorlatias tanácsokat ad, amelyeket a kutatók és a laboratóriumi technikusok azonnal alkalmazhatnak a kútlapok keresztszennyeződésének csökkentésére és minden kísérletük integritásának javítására.
A pipettezés a kútlapok feddhetetlenségének védelmére szolgál
A megfelelő pipettacsatékok kiválasztása a kútlapokhoz
A keresztszennyeződés egyik legközvetlenebb útja a jóllemezekben a pipettahegy. A szűrő nélküli vagy alacsony minőségű hegyek használata jelentősen növeli az aeroszol-átvitel kockázatát a jóllemezek között. A szűrős pipettahegyek fizikai gátot alkotnak, amely megakadályozza, hogy a folyadék visszakerüljön a pipetta hengerébe, így csökkentve annak esélyét, hogy egy jóllemez maradék mintája szennyezi a másikat. Mindig válasszon hegyeket, amelyek kompatibilisek a jóllemezei geometriájával, különösen akkor, ha 96 lyukas lemezekkel vagy magasabb sűrűségű formátumokkal dolgozik, ahol a lyukak közötti távolság minimális.
A kútlapok között a csúcsok cseréje egy másik nem tárgyalható gyakorlat a kútlapokkal való munka során. Még az azonosnak tűnő minták kezelésekor is hibát okozhat a biológiai változások vagy kémiai maradványok, ha ugyanazt a csúcsot újra használják. A kutatócsoport minden tagjának szigorú, egy-csapda-egyen-kutya-politika létrehozása segít megvédeni a kutatóhelyeken készült adatok megbízhatóságát minden tányérformátumban, a 6 kutya és a 384 kutya közötti konfigurációkban.
A pipettezés szöge és sebessége a kutaklapokban
Az a szög, amelyben a pipettát a lyukas lemez fölé tartják, fontosabb, mint ahogy sok kutató gondolná. A pipetta túlzott megdöntése vagy a folyadék nagy sebességgel történő kijuttatása fröccsenést okozhat, amely miatt anyag kerülhet egy lyukból a szomszédos lyukakba. Általában ajánlott a lassú, kontrollált kijuttatás kb. 45 fokos szögben, hogy minimalizálják a fröccsenésből eredő keresztszennyeződés kockázatát a lyukas lemezeknél. A laboratóriumi személyzet minden tagjának a helyes pipettázási testtartásra és sebességre vonatkozó képzése része kell, hogy legyen a rendszeres bevezetésnek és az időszakos minőség-ellenőrzéseknek.
Lyukas lemezek zárása és tárolása
Megfelelő zárófóliák használata lyukas lemezeknél
A megfelelő lezárás egy kritikus lépés, amelyet gyakran elhanyagolnak a mikrolemezeken végzett munka során. Lezáratlan vagy rosszul lezárt mikrolemezek kitévek maradnak a levegőben lebegő részecskéknek, a közeli reagensek illékony vegyületeinek és a környezeti páratartalomnak – mindezek károsíthatják a minták integritását. A mikrolemezekhez kifejezetten tervezett ragasztós lezárófóliák szoros, jól elkülönített akadályt képeznek minden egyes lyukra, megakadályozva a párolgást és az aeroszolok behatolását. PCR- vagy fluoreszcencián alapuló vizsgálatokhoz optikai lezárófóliákat használnak, amelyek átlátszóságukat megőrzik, miközben továbbra is védelmet nyújtanak a mikrolemezek szennyeződés ellen.
A jóllemezek tárolása vagy inkubálása során a lemezek egymásra helyezésekor mindig győződjön meg arról, hogy minden lemez teljesen le van zárva. A nem lezárt jóllemezek egymásra helyezése útvonalat teremt a folyadék átjutásához az egyik lemez alsó felületéről a közvetlenül alatta lévő lemez jövekbe. A külön erre a célra kifejlesztett lemezfedők vagy hőre zárható fóliák használata jelentősen csökkentheti ezt a kockázatot, és megőrzi a minták elkülönítését az összes jóllemezen a tárolás során.
Hőmérséklet- és környezeti vezérlés jóllemezekhez
A környezeti feltételek közvetlenül befolyásolják a keresztszennyeződés kockázatát a lyukas lemezekben. Az inkubátorok és tárolóterületek, amelyek stabil hőmérsékletet és páratartalmat biztosítanak, csökkentik a kondenzáció keletkezésének valószínűségét a lyukas lemezek felületén, ami folyadékátjutást okozhat a lyukak között. A lyukas lemezek elhelyezése vízszintes, rezgésmentes felületen szintén megakadályozza a passzív folyadékmozgást. Ha a lyukas lemezeket laboratóriumban szállítani kell, akkor biztonságos tartókészülékeket kell használni, amelyek megakadályozzák a lemezek megdőlését és a folyadék újraeloszlódását szállítás közben.
Laboratóriumi munkafolyamat tervezése a lyukas lemezek szennyeződésének minimalizálására
Mintafeldolgozási sorrend szervezése lyukas lemezekben
A minták jóllemezekre történő elrendezése és feldolgozása közvetlen hatással van a szennyeződés kockázatára. Többféle minta típus kezelése esetén egyetlen munkamenet során a mintákat a legalacsonyabb koncentrációtól a legmagasabb koncentrációig kell feldolgozni. Ez az egyszerű sorrendezési elv csökkenti annak kockázatát, hogy a magas koncentrációjú minták szennyezik a jóllemezek alacsonyabb koncentrációjú szomszédait, ahol a detekciós érzékenység megnövelheti akár a nyomnyomnyi keresztszennyeződés hatását is. A jóllemezek külön, kijelölt szekcióinak kijelölése specifikus mintakategóriák számára egy másik hatékony szervezési stratégia.
A negatív kontroll lyukakat rendszeresen be kell építeni minden lyukas lemez-készletbe, mint szokásos szennyeződés-monitorozási eszköz. Ha a negatív kontrollminta jelzést mutat, az egyértelmű jele annak, hogy keresztszennyeződés történt valahol a lyukas lemezekkel kapcsolatos munkafolyamatban. A kontrollminták rendszeres alkalmazása lehetővé teszi a csapatok számára, hogy korai stádiumban észleljék a szennyeződési eseményeket, és gyökér okvizsgálatot végezzenek, mielőtt azok nagyobb kísérleti sorozatokat vagy a lyukas lemezekből származó klinikai adatokat érintenék.
A lyukas lemezek környezetének felületi tisztítása és fertőtlenítése
A jóllemezek kezelésére szolgáló munkafelület gyakran alulbecsült szennyeződésforrás. A munkafelületeken felhalmozódó biológiai kórokozók, vegyi anyag-maradékok és részecskék átjuthatnak a jóllemezek aljára vagy külső peremére, és végül elérhetik a jóllemezek rekeszeit. A munkafelületek megfelelő fertőtlenítőszerekkel történő törlése minden munkamenet előtt, valamint – amennyiben lehetséges – egyszer használatos munkafelületi fóliák alkalmazása tisztább munkaterületet biztosít a jóllemezek kezeléséhez. Lamináris áramlású szekrények vagy bioszabványos biztonsági szekrények további védelmi réteget nyújtanak érzékeny minták jóllemezekben történő kezelésekor.
A kutatóknak szintén rendszeresen ellenőrizniük kell a mikrolemezeken lévő jólések állapotát használat előtt. Megrepedt, megcsavarodott vagy helytelenül gyártott mikrolemezek folyadék átszivárgását engedhetik meg a jólések között szerkezeti hibák miatt. A magas minőségű mikrolemezek – amelyeknek egyenletes jólgeometriájuk, sík aljuk és pontosan formázott jólfaluk van – jelentősen csökkentik a fizikai szennyeződési útvonalakat. Ellenőrizze minden mikrolemez-készletet látható hibák után, mielőtt bármilyen mintát betöltené.
GYIK
Mi okozza a keresztszennyeződést a mikrolemezek jólései között?
A keresztszennyeződés a mikrolemezek jólései között leggyakrabban a pipettacsúcsok újrahasználatából, a kis adagolás során keletkező aeroszolokból, a rossz zárásból, az agresszív pipettázásból származó fröccsenésből és a környezeti körülmények rossz szabályozásából származó kondenzációból adódik. Ezek mindegyike biológiai vagy kémiai anyagot juttathat egy jólésből a szomszédos jólésekbe bármilyen formátumú mikrolemezen.
Hogyan válasszak megfelelő mikrolemezeket a szennyeződési kockázat csökkentésére?
Válasszon jól gyártott mikrolemezeket, amelyek szigorú méreti tűréseknek felelnek meg, és egyértelműen meghatározott, mély kút falakkal rendelkeznek, amelyek ellenállnak a folyadék átjutásának. A magas minőségű, elsődleges polisztirolból készült lemezek, amelyeket egységes felületkezelés ér, csökkentik az adszorpció változékonyságát. Érzékeny vizsgálatokhoz olyan mikrolemezeket érdemes választani, amelyek egyedi kútfedelekkel vagy kompatibilis zárófóliákkal rendelkeznek, mivel ezek további védelmet nyújtanak a szennyeződés ellen a inkubáció és tárolás során.
Csökkentheti-e az automatizált folyadékkezelő rendszerek a keresztszennyeződést a mikrolemezekben?
Igen, az automatizált folyadékkezelő rendszerek jelentősen csökkenthetik az emberi hibából fakadó keresztszennyeződést a mikrolemezekben, mivel konzisztens pipettabeváltást, szabályozott adagolási sebességet és pontos pozicionálást biztosítanak minden kút fölött. Az automatizáció azonban nem szünteti meg az összes kockázatot – a berendezés kalibrálása, a pipettacsövek minősége és a munkaállomás elrendezése mind megfelelően kezelendő, hogy megvédjék a mikrolemezek integritását, amelyeket az automatizált rendszerek feldolgoznak.