טיפים להפחתת זיהום צולב בצלחות בוריות

הטיה משנית היא אחת הבעיות המתמשכות והיקרות ביותר בעבודת מעבדה, ו לוחות בוריות הן בין הכלים הפגיעים ביותר בכל תהליך עבודה במדעי החיים. האם אתם מבצעים סיכונים של תרופות בהיקף גבוה, ניסויי קיום תאים או פרוטוקולים סטנדרטיים של תרבות תאים – גם אירוע טיה קטן יכול לפגוע בניסוי בשלמותו. הבנת הדרך למנוע הטיה משנית במגשים (well plates) אינה אופציה – אלא דרישה בסיסית לייצור תוצאות שחוזרות על עצמן ואמינות.

צלחות בורות מעוצבות לאפשר עיבוד סימולטני של מספר דגימות בבורות מבודדים, אך הפרדה פיזית זו אינה מבטיחה באופן אוטומטי הפרדה ביולוגית או כימית. נדידת אאראוסול, טכניקת פיפטה לא תקינה, חסימה לקויה ותחזוקה לקויה של המעבדה עלולים להוביל לחדירת מזהמים בין הבורות. מאמר זה מספק עצות פרקטיות וניתנות ליישום שחוקרים וטכנאי מעבדה יכולים ליישם מיד כדי לצמצם את ההצטברות הצלעית בצלחות בורות ולשפר את האמינות של כל ניסוי שמופעל.

הנחיות לפיפטה שמשמרות את שלמות צלחת הבורות

בחירת קצות הפיפטה המתאימים לצלחות בורות

אחת המסלולים הישירים ביותר להזדהות חוצה בצלחות הבארים היא קצה הפיפטה. השימוש בקצות פיפטה שאינם מסוננים או באיכות נמוכה מגדיל באופן משמעותי את הסיכון להעברת אירוסולים בין בארים. קצות פיפטה מסוננים יוצרים מחסום פיזי שמנע מהנוזל לזרום בחזרה לתוך גוף הפיפטה, ובכך מפחיתים את הסיכוי שנותר של דגימה מאחד הבארים יلوות את הדגימה הבאה. יש תמיד לבחור קצות פיפטה שמתאימים לגאומטריה של צלחות הבארים שלכם, במיוחד כשמעבדים עם צלחות של 96 בארים או בפורמטים בעלי צפיפות גבוהה יותר, שבהם המרחק בין הבארים הוא מינימלי.

החלפת הטייפים בין כל בור היא עוד אחת מההנחיות החובה בעת עבודה עם לוחות בורות. גם כאשר מתמודדים עם דגימות שנראות זהות, השונות הביולוגית או שאריות כימיות מזעריות עלולות לגרום לשגיאות אם משתמשים באותו טייפ יותר מפעם אחת. הקמת מדיניות מחמירה של 'טייפ אחד לכל בור' בקרב כל חברי הצוות עוזרת להגן על אמינות הנתונים המתקבלים מלוחות הבורות בכל תבנית לוח – מ-6 בורות ועד 384 בורות.

זוית ומהירות ההזרקה בלוחות בורות

הזווית שבה אוחזים את הפיפטה מעל לצלחות הבארים חשובה יותר ממה שמרבים מהחוקרים מבינים. נטיה חדה מדי של הפיפטה או השקה של נוזל במהירות גבוהה עלולה לגרום להתפזרות, אשר תביא להעברת חומר מאחד הבארים לבארים הסמוכים. בדרך כלל מומלץ להשיק באיטיות ובשליטה בזווית של כ-45 מעלות כדי למזער את הסיכון לזיהום צולב המבוסס על התפזרות בצלחות הבארים. האימון של כל עובדי המעבדה על עמדת הפיפטה הנכונה ומהירות ההשקה הראויה לצלחות הבארים חייב להיות חלק מההשתלבות הרגילה ומחזורי ביקורת האיכות המחזוריים.

אשכולות איטום ואחסון לצלחות בארים

שימוש בסרטים מתאימים לאיטום צלחות בארים

אטום נכון הוא צעד קריטי שמרבה להתעלם כאשר עובדים עם לוחות באר. צלחות באר לא סגורות או סגורות בצורה גרועה חשופות לחלקיקים באוויר, תרכובות נעות ממיצבים קרובים ולריחות סביבתית, שכולן עלולות לסכן את שלמות הדגימה. סרטים דביקים מיועדים במיוחד לטיפות הבאר מספקים מחסום הדוק, טוב-על-באר, המונע הידות והפרצות אסטרוזול. עבור יישומים הכוללים PCR או ניסויים מבוססי פלורוסצ'ן, סרטים אבטליים לחיסום שומרים על שקיפות תוך שמירה על לוחות הבאר מפני זיהום.

בעת סידור צלחות בורות באחסון או באינקובציה, יש תמיד להבטיח שכל צלחת נסגרת לחלוטין לפני הסידור. סידור צלחות בורות לא נסגורות אחת על השנייה יוצר מסלול להעברת נוזלים מהמשטח התחתון של צלחת אחת לתוך הבורות של הצלחת שמתחתיו. השימוש במכסים מיוחדים לצלחות או בסרטים המודבקים בחום יכול לצמצם באופן משמעותי את הסיכון הזה ולשמור על הפרדה בין הדגימות בכל צלחות הבורות באחסון.

בקרת טמפרטורה וסביבה לצלחות בורות

תנאי הסביבה משפיעים ישירות על הסיכון לזיהום צולב בצידי באר. אינקובוטורים ואזורים אחסון שממשיכים לשמור על טמפרטורה ולחות יציבים מקלילים את הסיכוי להתפתחות קונדרסציה על לוחות הבאר, אשר עלולה לגרום לגלוש נוזלים בין הבארות. מיקום שללוחות הבאר על רמה, משטחים ללא הרטטים גם מונע תנועת נוזל פסיבית. אם לוחיות הבאר צריכות להיות נשאו בתוך מעבדה, להשתמש נושאים מאובטחים המונעים כיפול ופיזור מחדש של נוזל במהלך המעבר.

עיצוב זרימת עבודה במעבדה כדי למזער זיהום בלוחי באר

ארגון סדר עיבוד דגימות בלוחי הבאר

איך המUESTרים מאורגנים ומעובדים על לוחות בוריות משפיע ישירות על סיכון לזיהום. בעת טיפול במספר סוגי מUESTרים באותה הפעולה, יש לעבד את המUESTרים מהריכוז הנמוך ביותר לגבוה ביותר. עיקרון הסידור הפשוט הזה מפחית את הסיכון שמאגרים בריכוז גבוה יזוהמו את השכנים בריכוז נמוך יותר על לוחות הבוריות, שם רגישות זיהוי יכולה להגביר את ההשפעה של זיהום חéo-ערכי אפילו ברמות זעירות. הקצאת מקטעים מיוחדים על לוחות הבוריות לקטגוריות מסוימות של מUESTרים היא אסטרטגיה ארגונית יעילה נוספת.

להכניס בארות בקרת שלילה לכל סט של לוחות בארות ככלי שגרתי לניטור זיהום. אם בארות הבקרה השליליות מראות אות, זהו סימן ברור לכך שאירע זיהום חוצץ באיזשהו מקום בתהליך העבודה שכולל את לוחות הבארות שלכם. ההכללה השגרתית של בקרים מאפשרת לצוותים לזהות אירועים של זיהום מוקדם ולחקור את הסיבות העמוקות שלהם לפני שהם משפיעים על מנות גדולות של ניסויים או על נתונים קליניים שנוצרו מלוחות בארות.

ניקוי וסילוק זיהומים משטח סביב לוחות בארות

המשטח של השולחן שבו מתמודדים עם לוחות הבארים הוא מקור זיהום שמתעלמים ממנו לעיתים קרובות. סוכנים ביולוגיים, שאריות כימיקלים וחלקיקים שצוברים על משטחי העבודה יכולים לעבור אל התחתית או לשפת החיצונית של לוחות הבארים, ולגעת לבסוף בבארים עצמם. ניקוי משטחי השולחן באמצעות מזוהמים מתאימים לפני כל ישיבה, ושימוש במכסים חד-פעמיים לשולחנות כאשר זה אפשרי, יוצרים אזור עבודה נקי יותר לטיפול בלוחות הבארים. תאורת זרימה למינרית או ארונות בטיחות ביולוגית מספקים שכבה נוספת של הגנה בעת עבודה עם דוגמאות רגישות במיוחד בלוחות הבארים.

חוקרים צריכים גם לבדוק באופן שגרתי את מצב לוחות הבארים לפני השימוש בהם. לוחות בארים שסדקים בהם, מעוותים או יוצרו בצורה לא תקינה עלולים לאפשר לנחיתה לחדור בין הבארים דרך פגמים במבנה. בחירת לוחות בארים באיכות גבוהה עם גאומטריה אחידה של הבארים, קרקעית שטוחה וקירות בארים מיוצרים بدقة מופחתת משמעותית את מסלולי ההזדהות הפיזיקלית. יש לבדוק כל סט של לוחות בארים למציאת פגמים נראים לפני טעינת דוגמאות כלשהן.

שאלה נפוצה

מה גורם לזיהום צולב בין בארים בלוחות בארים?

הזיהום הצולב בלוחות בארים נגרם בדרך כלל על ידי שימוש חוזר בקצות המזרקים, יצירת אדים במהלך ההתפזרות, החסימה הלא תקינה, התפזרות עקב זריקה אגרסיבית במזרק והתרחשות של רטיבות בשל בקרה לקויה של הסביבה. כל אחד מהגורמים הללו יכול להוביל להעברת חומר ביולוגי או כימי מאחד הבארים לבארים הסמוכים לו בלוחות בארים בכל פורמט.

איך לבחור את לוחות הבארים המתאימים כדי לצמצם את סיכון הזיהום?

בחרו צלחות בורות המיוצרות עם סיבובים ממדיים צרים ועם קירות בורות עמוקים ומוגדרים בבירור שמעכבים מעבר נוזלי בין הבורות. צלחות בורות המיוצרות מפוליסטירן טהור באיכות גבוהה עם טיפול משטח עקבי מפחיתים את השונות בהיצמדות. עבור ניסויים רגישים, צלחות בורות עם כיסויים פרטניים לבורות או סרטים אטומים תואמים מספקים מחסום נוסף נגד זיהום במהלך האינקובציה והאחסון.

האם מערכות אוטומטיות להעברת נוזלים יכולות לצמצם זיהום חéo-בורי בצלחות בורות?

כן, מערכות אוטומטיות להעברת נוזלים יכולות לצמצם באופן משמעותי את הזיהום החéo-בורי הנגרם על ידי שגיאות אנושיות בצלחות בורות באמצעות החלפת עטים עקביות, מהירויות הזרקה מבוקרות ומיקום מדויק מעל כל בור. עם זאת, האוטומציה אינה מאפסת את כל הסיכונים – קליברציה של המכשיר, איכות העטים וסדר המערך על הדסקה חייבים להיות מנוהלים כראוי כדי להגן על שלמותן של צלחות הבורות המעובדות על ידי מערכות אוטומטיות.