Saveti za smanjenje unakrsne kontaminacije u čahurima

Križna kontaminacija je jedan od najtrajnijih i najskupljih problema u laboratorijskom radu, a čelične ploče su među najranjivijim alatima u bilo kojem toku rada na znanosti o životu. Bilo da se radi o visoko-proizvodnom ispitivanju lijekova, ispitivanju ćelijske održivosti ili standardnim protokolima kulture ćelija, čak i mali slučaj kontaminacije može ugroziti cijeli eksperiment. Razumevanje načina sprečavanja unakrsne kontaminacije u česticama ne treba da bude opcija, već je osnovni uslov za dobijanje ponovljivih, pouzdanih rezultata.

Čelične ploče su dizajnirane tako da omogućavaju istovremenu obradu više uzoraka u izolovanim bunarima, ali fizička separacija ne garantuje automatski biološku ili hemijsku izolaciju. Migracija aerosola, nepravilna tehnika pipetiranja, neadekvatno zatvaranje i loša higijena laboratorija mogu omogućiti da kontaminanti putuju između bunara. Ovaj članak sadrži praktične savjete koje istraživači i laboratorijski tehničari mogu odmah primeniti kako bi smanjili unakrsnu kontaminaciju u čahurima i poboljšali integritet svakog eksperimenta koji sprovode.

Praksa pipiranja koja štiti integritet čelične ploče

Izbor prave pipete za ploče za bunare

Jedan od direktnih puteva unakrsne kontaminacije u česticama je vrh pipete. Upotreba nefiltriranih ili loših vrhova značajno povećava rizik od prenosa aerosola između bunara. Filtrirani vrhovi pipete stvaraju fizičku barijeru koja sprečava da se tečnost povuče nazad u bačvu pipete, smanjujući šansu da ostatak uzorka iz jednog bunara kontaminira drugi. Uvek birajte vrhove koji su kompatibilni sa geometrijom ploča za bunar, posebno kada radite sa 96-držnih ploča ili formata sa većom gustoćom gdje je razmak između bunara minimalan.

Promjena vrhova između svakog bunara je još jedna praksa koja se ne može pregovarati kada se radi sa tanjirskim pločama. Čak i kada se rukovode uzorcima koji izgledaju identično, biološka varijacija ili tragovi hemijskih ostataka mogu dovesti do greške ako se isti vrh ponovo koristi. Uspostavljanje stroge politike "jedan savjet po bunaru" za sve članove tima pomaže zaštiti pouzdanosti podataka generiranih sa ploča od bunara u svakom formatu ploča od konfiguracije od 6 do 384 bunara.

Ugao i brzina pipeta u pločama za bunar

Uglo pod kojim se pipeta drži iznad ploča bunara je važnije nego što mnogi istraživači shvataju. Ako se pipeta nagne previše agresivno ili se tečnost ispušta velikom brzinom, može doći do prskanja koje dovodi materijal iz jednog bunara u susjedne bunare. Uobičajeno se preporučuje spor, kontrolisan ugao isporuke od oko 45 stepeni kako bi se smanjio rizik od unakrsne kontaminacije u pločama bunara. Učenje svih laboratorijskih radnika o ispravnom položaju i brzini pipetiranja za ploče bukve treba da bude deo rutinske integracije i periodičnih pregleda kvaliteta.

Strategije za zapečaćivanje i skladištenje ploča za bunare

Upotreba odgovarajućih filmskih čepova na pločama bunara

Pravilno zapečaćivanje je kritičan korak koji se često zanemaruje pri radu sa pločama za bunare. Neotvorene ili loše zatvorene ploče bunara izložene su česticama u zraku, nestabilnim spojevima iz obližnjih reagensa i vlažnosti okoline sve to može ugroziti integritet uzorka. Adhesivni filmski testere posebno dizajnirani za ploče bunara pružaju čvrstu barijeru koja sprečava ispiranje i upad aerosola. Za primjene koje uključuju PCR ili fluorescencijska ispitivanja, optički filmski testere održavaju transparentnost, a istovremeno štite ploče od kontaminacije.

Kada se uložiti ploče za bunar tokom skladištenja ili inkubacije, uvek se mora osigurati da je svaka ploča potpuno zatvorena pre uloženja. Stapling neotkrivenih čeličnih ploča jedna iznad druge stvara put za prenos tečnosti sa donje površine jedne ploče u čelice ispod ploče. Upotreba posebnih poklopaka ploča ili toplotno zatvorenih folija može dramatično smanjiti ovaj rizik i sačuvati razdvajanje uzoraka na svim pločama u skladištu.

Temperatura i kontrola okoline za ploče bunara

U slučaju da se ne primenjuje, za svaku od ovih supstanci treba se utvrditi da je u skladu sa člankom 6. stavkom 1. U slučaju da se ne primenjuje sistem za zaštitu od eksploatacije, u slučaju da se ne primeni sistem za zaštitu od eksploatacije, treba se utvrditi da je sistem za zaštitu od eksploatacije zaštićen. Položaj ploča na ravnim površinama bez vibracija takođe sprečava pasivno kretanje tečnosti. Ako se čelične ploče moraju transportovati unutar laboratorija, koristite sigurne nosioce koji sprečavaju nagib i redistribuciju tečnosti tokom transporta.

Dizajn laboratorijskog radnog toka za minimiziranje kontaminacije u česticama bunara

Organizacija redoslijeda obrade uzoraka u česticama za bunare

Način na koji su uzorci organizovani i obrađeni na pločama bunara ima direktan uticaj na rizik od kontaminacije. Kada se u jednom postupku obrađuje više tipova uzoraka, uzorci se obrađuju od najniže do najviše koncentracije. Ovaj jednostavan princip raspoređivanja smanjuje rizik da uzorci visoke koncentracije kontaminiraju susjede sa manjom koncentracijom u česticama bunara, gdje osetljivost detekcije može pojačati uticaj čak i tragove unakrsne kontaminacije. Prikazivanje posebnih dijelova ploča na određene kategorije uzoraka je još jedna efikasna organizaciona strategija.

U svaki set ploča za bunar uključite negativne kontrolne bunare kao rutinsko sredstvo za praćenje kontaminacije. Ako negativne kontrole pokažu signal, to je jasan pokazatelj da je došlo do unakrsne kontaminacije negdje u toku rada koji uključuje vaše ploče. Rutinsko uključivanje kontrola omogućava timovima da rano uhvate događaje kontaminacije i istraže osnovne uzroke pre nego što utiču na velike serije eksperimenata ili kliničke podatke generirane iz čestica.

Čišćenje površine i dekontaminacija oko ploča bunara

Površina stolice na kojoj se rukovode pločama od bunara je često podcijenjen izvor zagađenja. Biološki agensi, hemijski ostaci i čestice koje se nakupljaju na radnim površinama mogu se preneti na dno ili spoljašnji rub ploča bunara, a na kraju stižu do bunara. Pre svakog treninga, obrišite površine klopica odgovarajućim dezinfekcionim sredstvima i koristite jednokratne obloge za klopice, gde je to praktično, što stvara čistiju radnu zonu za rukovanje s čistima ploča. Laminarne kapsule za protok ili ormari za biološku sigurnost pružaju dodatni sloj zaštite pri radu sa posebno osetljivim uzorcima u česticama.

Istraživači bi takođe trebali redovno da pregledaju stanje ploča iz bunara pre upotrebe. Razbijene, iskrivljene ili nepravilno izrađene ploče od bunara mogu omogućiti da tečnost prolazi između bunara zbog strukturnih mana. Izbor visokokvalitetnih ploča sa konzistentnom geometrijom bunara, ravnim dnom i precizno oblikovanim zidovima bunara značajno smanjuje putove fizičke kontaminacije. Pre utovaranja uzoraka svaki set ploča za bunar treba pregledati na vidljive nedostatke.

Često postavljana pitanja

Šta uzrokuje unakrsnu kontaminaciju između bunara u bunarskim pločama?

Križna kontaminacija u česticama za bunare najčešće je uzrokovana ponovnom upotrebom vrhova pipeta, stvaranjem aerosola tokom isporuke, nepravilnim zapečaćivanjem, prskavanjem agresivnim pipetiranjem i kondenzacijom zbog loše kontrole okoliša. Svaki od ovih faktora može premjestiti biološki ili hemijski materijal iz jedne bušotine u susjedne bušotine preko bušinskih ploča bilo kog formata.

Kako da izaberem prave ploče za bunare kako bih smanjio rizik od kontaminacije?

Izbor ploča za bunare koji su proizvedeni prema strogim tolerancijama dimenzija sa jasno definisanim, dubokim zidovima bunara koji otporni na prelazak tečnosti. Ploče od visokokvalitetnog, nevinog polistirena sa doslednim tretmanom površine smanjuju promjenljivost adsorpcije. Za osetljive analize, ploče s individualnim poklopcima za bunare ili kompatibilni filmski zatvarači pružaju dodatnu barijeru protiv kontaminacije tokom inkubacije i skladištenja.

Mogu li automatizovani rukovatelji tečnosti smanjiti unakrsnu kontaminaciju u česticama bunara?

Da, automatizovani sistemi za rukovanje tečnosti mogu značajno smanjiti unakrsnu kontaminaciju u pločama bunara uzrokovanu ljudskom greškom tako što će omogućiti doslednu promjenu vrha, kontrolisane brzine isporuke i precizno pozicioniranje na svakom bunaru. Međutim, automatizacija ne eliminiše sve rizike kalibracija instrumenta, kvalitet vrha i raspored palube moraju biti pravilno upravljani kako bi se zaštitio integritet ploča bunara koje obrađuju automatizovani sistemi.