ຄຳແນະນຳເພື່ອຫຼີກລ່ຽງການໄຫຼຫຼຸດຂອງຕົວຢ່າງໃນຂະນະທີ່ໃຊ້ທໍ່ PCR

ການໄຫຼລະເຫີຍຂອງຕົວຢ່າງເປັນໜຶ່ງໃນບັນຫາທີ່ສຳຄັນທີ່ສຸດໃນບົດແນວການປະຕິກິລິຍາລູບ polymerase (PCR), ເຊິ່ງອາດຈະເຮັດໃຫ້ຄວາມຖືກຕ້ອງ ແລະ ຄວາມສາມາດໃນການເຮັດຊ້ຳຜົນໄດ້ຮັບເສຍຫາຍ. ເມື່ອເຮັດວຽກກັບທໍ່ PCR, ການເຂົ້າໃຈກົນໄກທີ່ເຮັດໃຫ້ເກີດການໄຫຼລະເຫີຍ ແລະ ການນຳໃຊ້ຍຸດທະສາດທີ່ມີປະສິດທິພາບໃນການປ້ອງກັນຈະເປັນສິ່ງຈຳເປັນເພື່ອຮັກສາຜົນໄດ້ຮັບການເພີ່ມຈຳນວນທີ່ສົມ່ຳເສີມ. ການປ່ຽນແປງຂອງອຸນຫະພູມ, ການປິດທັບທີ່ບໍ່ເພີ່ຍງພໍ, ແລະ ສະພາບການຈັດເກັບທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງ ສາມາດເຮັດໃຫ້ເກີດການສູນເສຍປະລິມານຕົວຢ່າງຢ່າງມີນັກໃນຂະນະທີ່ດຳເນີນການເຄື່ອນທີ່ອຸນຫະພູມ.

ຊ່າງຫຼັກສູດທີ່ເຮັດວຽກໃນຫ້ອງປະສົບການ ເຊິ່ງເຮັດວຽກກັບການນຳໃຊ້ດ້ານຊີວະວິທະຍາໂມເລກຸນ ຈຳເປັນຕ້ອງເຂົ້າໃຈວ່າ ການໄຫຼຫຼຸດລົງເລັກນ້ອຍທີ່ສຸດກໍສາມາດປ່ຽນແປງຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງປະຕິກິລິຍາໄດ້ຢ່າງຮຸນແຮງ ເຮັດໃຫ້ການຂະຫຍາຍ (amplification) ລົ້ມເຫຼວ ຫຼື ຜົນໄດ້ຮັບທີ່ບໍ່ສອດຄ່ອງກັນ. ຄວາມສົມດຸນທີ່ບໍ່ຄ່ອຍເສຖຽນຂອງສານເຄມີ, ສານເລີ່ມຕົ້ນ (primers), ແລະ DNA ທີ່ເປັນແບບຈຳລອງ (template DNA) ຕ້ອງການການຮັກສາປະລິມານທີ່ຖືກຕ້ອງຢ່າງເປັກຕີກ ໃນທັງໝົດຂອງຂະບວນການຮ້ອນເປີ່ຍນ (thermal cycling). ປັດຈຸບັນ ອຸປະກອນທໍ່ PCR ໄດ້ພັດທະນາໄປຢ່າງຫຼວງຫຼາຍເພື່ອຮັບມືກັບບັນຫາເຫຼົ່ານີ້ ໂດຍການນຳໃຊ້ວັດສະດຸທີ່ທັນສະໄໝ ແລະ ລັກສະນະການອອກແບບທີ່ທັນສະໄໝ ເຊິ່ງຊ່ວຍຫຼຸດຜ່ອນຄວາມສ່ຽງຈາກການໄຫຼຫຼຸດລົງ ແລະ ຮັກສາຄຸນສົມບັດການຖ່າຍເທີມຄວາມຮ້ອນໃຫ້ດີທີ່ສຸດ.

ການເຂົ້າໃຈກົນໄກການໄຫຼຫຼຸດລົງໃນການນຳໃຊ້ PCR

ປັດໄຈທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບອຸນຫະພູມທີ່ສົ່ງຜົນຕໍ່ການໄຫຼຫຼຸດລົງ

ຂັ້ນຕອນການເຮັດໃຫ້ປະກົດຢ່າງຮຸນແຮງທີ່ອຸນຫະພູມສູງໃນບົດແນວການ PCR ສ້າງເງື່ອນໄຂຫຼັກສຳລັບການລະເຫີຍນຂອງຕົວຢ່າງ, ໂດຍເປີດເຜີຍຢ່າງເດັ່ນຊັດເປັນພິເສດເມື່ອອຸນຫະພູມເຖິງ 94-98°C ໃນຂັ້ນຕອນການເຮັດໃຫ້ປະກົດຢ່າງຮຸນແຮງເບື້ອງຕົ້ນ. ຄວາມດັນຂອງໄອນ້ຳໃນວິທີການທີ່ເປັນນ້ຳເພີ່ມຂຶ້ນຢ່າງເປັນເລກຊີ້ຈັດຕາມອຸນຫະພູມ, ຈຶ່ງເຮັດໃຫ້ໂມເລກຸນນ້ຳປ່ຽນຈາກສະພາບແວດລົມເປັນຂອງເຫຼວໄປເປັນສະພາບແວດລົມເປັນໄອໄດ້ຢ່າງງ່າຍດາຍ. ບໍ່ດີ່ PCR ຕ້ອງສາມາດຕ້ານທານການປ່ຽນແປງອຸນຫະພູມທີ່ຮຸນແຮງເຫຼົ່ານີ້ໄດ້ ໃນຂະນະທີ່ຮັກສາຄວາມເຂັ້ມແຂງຂອງໂຄງສ້າງ ແລະ ຄວາມສາມາດໃນການປິດຜາກຢ່າງເຕັມທີ່ໃນໄລຍະທີ່ມີການເຮັດວຽກດ້ວຍຄວາມຮ້ອນຫຼາຍຄັ້ງ.

ຄຸນສົມບັດການນຳຄວາມຮ້ອນຂອງວັດສະດຸທໍ່ທີ່ແຕກຕ່າງກັນມີບົດບາດສຳຄັນຢ່າງຍິ່ງຕໍ່ການຈັດສົ່ງຄວາມຮ້ອນ ແລະ ການປ້ອງກັນການລະເຫີຍນ. ທໍ່ PCR ທີ່ເຮັດຈາກ polypropylene ແມ່ນມີຄວາມຕ້ານທາງເຄມີທີ່ດີເລີດ ແລະ ຄວາມສະຖຽນຂອງອຸນຫະພູມ, ເຮັດໃຫ້ເປັນທໍ່ທີ່ເໝາະສົມທີ່ສຸດສຳລັບການນຳໃຊ້ທີ່ຕ້ອງການການຄວບຄຸມອຸນຫະພູມຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງ. ຄວາມໜາຂອງຜະນັງຂອງທໍ່ທີ່ມີຄວາມເປັນພິເສດເຫຼົ່ານີ້ມີຜົນຕໍ່ທັງປະສິດທິພາບການຖ່າຍໂອນຄວາມຮ້ອນ ແລະ ຄວາມຕ້ານທາງຕໍ່ການລະເຫີຍນ, ຈຶ່ງຕ້ອງມີການປົບດຸນຢ່າງລະມັດລະວັງລະຫວ່າງການເຄື່ອນໄຫວຂອງອຸນຫະພູມທີ່ເໝາະສົມທີ່ສຸດ ແລະ ການຮັກສາຕົວຢ່າງ.

ຜົນກະທົບຈາກຄວາມກົດດັນຂອງບໍລະຍາກາດ ແລະ ຄວາມຊື້ນ

ສະພາບແວດລ້ອມທີ່ຢູ່ເຄິ່ງຂ້າງຂອງທໍ່ PCR ມີຜົນຕໍ່ອັດຕາການໄຫຼລະເຫີຍຂອງຕົວຢ່າງໃນຂະນະທີ່ປະຕິບັດຂະບວນການຖ່າຍເທີມີການຮ້ອນ. ສະພາບອາກາດທີ່ມີຄວາມຊື້ນຕ່ຳຈະເຮັດໃຫ້ນ້ຳໃນຕົວຢ່າງໄຫຼລະເຫີຍໄວຂຶ້ນ, ໃນຂະນະທີ່ສະພາບອາກາດທີ່ມີຄວາມຊື້ນສູງອາດຈະຫຼຸດຜ່ອນການໄຫຼລະເຫີຍແຕ່ອາດຈະເກີດບັນຫາການກໍ່ຕົວຂອງນ້ຳຄ້າງ. ຄວາມສູງຂອງຫ້ອງທົດລອງ ແລະ ການປ່ຽນແປງຂອງຄວາມກົດອາກາດກໍສົ່ງຜົນຕໍ່ຈຸດເດືອນຂອງວິທະຍາສາດທີ່ເປັນນ້ຳ, ເຊິ່ງຈະມີຜົນຕໍ່ການໄຫຼລະເຫີຍໃນຂະນະທີ່ປະຕິບັດຂະບວນການຖ່າຍເທີມີການຮ້ອນທີ່ອຸນຫະພູມສູງ.

ຮູບແບບການລົມທີ່ເກີດຂຶ້ນພາຍໃນເຄື່ອງຖ່າຍເທີມີການຮ້ອນຈະສ້າງເປັນການເຄື່ອນທີ່ຂອງລົມທີ່ສາມາດເຮັດໃຫ້ການໄຫຼລະເຫີຍຈາກທໍ່ PCR ທີ່ປິດບໍ່ດີເພີ່ມຂຶ້ນ. ການເຂົ້າໃຈເຖິງອິດທິພົນຂອງສະພາບອາກາດເຫຼົ່ານີ້ຈະຊ່ວຍໃຫ້ນັກຄົ້ນຄວ້າສາມາດນຳໃຊ້ວິທີການປ້ອງກັນທີ່ເໝາະສົມ, ເຊັ່ນ: ການໃຊ້ຝາປິດທີ່ມີຄວາມຮ້ອນ ແລະ ການປັບປຸງສະພາບແວດລ້ອມຂອງຫ້ອງທົດລອງເພື່ອຮັກສາສະພາບການທົດລອງທີ່ຄົງທີ່.

ວິທີການປິດທໍ່ PCR ຢ່າງຖືກຕ້ອງ

ການເລືອກເອົາຝາປິດ ແລະ ວິທີການນຳໃຊ້

ການເລືອກຝາປິດທີ່ເໝາະສົມສຳລັບທໍ່ PCR ຕ້ອງພິຈາລະນາຄວາມເຂົ້າກັນໄດ້ຂອງວັດສະດຸ, ກົກການປິດຢ່າງໃຫ້ແໜ້ນ, ແລະ ຂໍ້ກຳນົດດ້ານອຸນຫະພູມໃນຂະນະທີ່ເຮັດວຽກ. ຝາປິດແບບລຽບໃຫ້ການປິດຢ່າງໃຫ້ແໜ້ນຢ່າງດີສຳລັບການນຳໃຊ້ທົ່ວໄປ, ໃນຂະນະທີ່ຝາປິດແບບເປັນໂລ້ມມີພື້ນທີ່ຫວ່າງເພີ່ມເຕີມເພື່ອໃຫ້ເໝາະສົມກັບການປະຕິກິລິຍາທີ່ອາດຈະເກີດເປັນຟອງອາຍແກັສ ຫຼື ຕ້ອງການການປີ້ນປົ້ນໃນຂະນະທີ່ເຮັດວຽກ. ພື້ນທີ່ຜິວທີ່ປິດຢ່າງໃຫ້ແໜ້ນລະຫວ່າງຝາປິດ ແລະ ສ່ວນປາກຂອງທໍ່ ມີຄວາມສຳພັນໂດຍກົງກັບປະສິດທິຜົນໃນການປ້ອງກັນການລະເຫີຍນ.

ວິທີການຕິດຕັ້ງຝາປິດຢ່າງຖືກຕ້ອງ ປະກອບດ້ວຍການຮັບປະກັນວ່າຜິວທີ່ປິດຢ່າງໃຫ້ແໜ້ນຈະສຳຜັດກັບສ່ວນປາກຂອງທໍ່ຢ່າງເຕັມທີ່ ໂດຍບໍ່ຕ້ອງຂັນເກີນໄປ, ເຊິ່ງອາດຈະເຮັດໃຫ້ເກີດຄວາມເສຍຫາຍຕໍ່ເກີດເສັ້ນເກີດ ຫຼື ເກີດເປັນແຕກຫັກຈາກຄວາມເຄັ່ງຕຶງ. ທໍ່ PCR ມີເກີດເສັ້ນເກີດທີ່ຖືກຂຶ້ນຮູບດ້ວຍຄວາມຖືກຕ້ອງ ແລະ ຜິວທີ່ປິດຢ່າງໃຫ້ແໜ້ນທີ່ມີຄຸນນະພາບສູງ ເຊິ່ງໃຫ້ຄວາມຕ້ານທານຕໍ່ການລະເຫີຍນໄດ້ດີເລີດເມື່ອຝາປິດຖືກຕິດຕັ້ງດ້ວຍຄວາມເຄັ່ງຕຶງທີ່ສອດຄ່ອງກັນທັ້ງໝົດໃນຕົວຢ່າງທັງໝົດ.

ວິທີການປິດຢ່າງໃຫ້ແໜ້ນທາງເລືອກອື່ນ

ຟີລ໌ປິດຜົນຢູ່ທີ່ໃຊ້ຄວາມເຂັ້ມແຂງເປັນທາງເລືອກທີ່ມີປະສິດທິພາບຕໍ່ຝາປິດແບບດັ້ງເດີມ ສຳລັບການນຳໃຊ້ທໍ່ PCR ໃນຮູບແບບແຖວ ຫຼື ແຜ່ນ ເຊິ່ງຕ້ອງການຄວາມໄວສູງ. ຟີລ໌ທີ່ປິດຜົນເຫຼົ່ານີ້ຖືກອອກແບບເປັນພິເສດເພື່ອໃຫ້ມີຄວາມດັນໃນການປິດຜົນທີ່ເທົ່າທຽມກັນທົ່ວທຸກຕົວຢ່າງ ແລະ ຍັງອະນຸຍາດໃຫ້ມີການເຂົ້າເຖິງດ້ານແສງເພື່ອການຕິດຕາມແບບຈິງໃນເວລາຈິງ. ຟີລ໌ທີ່ປິດຜົນດ້ວຍຄວາມຮ້ອນຈະສ້າງສິ່ງກີດຂວາງທີ່ແຂງແຮງເປັນພິເສດຕໍ່ການລະເຫີຍນ ໂດຍການສ້າງພັນທະບາງໂມເລກຸນກັບພື້ນຜິວຂອງດ້ານເທິງຂອງທໍ່.

ແຜ່ນປິດຜົນທີ່ເຮັດຈາກຊີລິໂຄນເປັນທາງເລືອກທີ່ສາມາດນຳໃຊ້ຄືນໄດ້ ສຳລັບຫ້ອງທົດລອງທີ່ດຳເນີນການທົດລອງຊ້ຳໆກັນດ້ວຍປະລິມານຕົວຢ່າງທີ່ຄ້າຍຄືກັນ. ວັດສະດຸທີ່ມີຄວາມຍືດຫຍຸ່ນເຫຼົ່ານີ້ສາມາດປັບຕົວເຂົ້າກັບຮູບຮ່າງທີ່ບໍ່ສະເໝີພາກຂອງດ້ານເທິງຂອງທໍ່ ແລະ ຮັກສາຄວາມເຂັ້ມແຂງໃນການປິດຜົນໄວ້ໄດ້ໃນຫຼາຍວົງຈອນການເຮັດຄວາມຮ້ອນ-ເຢັນ ເຮັດໃຫ້ເປັນທາງເລືອກທີ່ຄຸ້ມຄ່າສຳລັບການນຳໃຊ້ PCR ໃນປະຈຳວັນ.

ຍຸດທະສາດໃນການປັບປຸງເครື່ອງຈັກຄວາມຮ້ອນ

ການຈັດຕັ້ງຄ່າຝາປິດທີ່ມີຄວາມຮ້ອນ

ເຕັກໂນໂລຢີຝາປິດທີ່ຖືກໃຫ້ຄວາມຮ້ອນແທນສິ່ງທີ່ມີປະສິດທິພາບທີ່ສຸດໃນການປ້ອງກັນການກໍ່ຕົວຂອງນ້ຳແລະການໄຫຼລະເຫີຍໃນທໍ່ PCR ໄ время ການປ່ຽນຄວາມຮ້ອນ. ການຮັກສາອຸນຫະພູມິຂອງຝາປິດໃຫ້ສູງກວ່າອຸນຫະພູມິສູງສຸດໃນຂະນະທີ່ປ່ຽນຄວາມຮ້ອນ 5-10°C ຈະຊ່ວຍປ້ອງກັນການກໍ່ຕົວຂອງໄອນ້ຳໃນຝາປິດຂອງທໍ່ ແລະ ສ້າງສິ່ງກີດຂວາງທາງຄວາມຮ້ອນທີ່ຈະຫຼຸດຜ່ອນກຳລັງຂອງການໄຫຼລະເຫີຍ. ການຕັ້ງຄ່າຄວາມກົດຂອງຝາປິດທີ່ຖືກໃຫ້ຄວາມຮ້ອນຢ່າງເໝາະສົມຈະຮັບປະກັນການສຳຜັດທີ່ພໍເທົ່າທີ່ຈະເຮັດໄດ້ກັບຝາປິດຂອງທໍ່ໂດຍບໍ່ເຮັດໃຫ້ບໍລິຈາກເສຍຮູບ ຫຼື ຂັດຂວາງການຖ່າຍເທີມຄວາມຮ້ອນ.

ຄວາມເໝືອນກັນຂອງອຸນຫະພູມິທົ່ວທັງໝົດທີ່ເກີດຂື້ນໃນເຂດໜ້າເທິງຂອງຝາປິດທີ່ຖືກໃຫ້ຄວາມຮ້ອນຈະເປັນສິ່ງທີ່ສຳຄັນຫຼາຍເມື່ອປະມວນຜົນທໍ່ PCR ເປັນຈຳນວນຫຼາຍໃນເວລາດຽວກັນ. ຮູບແບບການໃຫ້ຄວາມຮ້ອນທີ່ບໍ່ເໝືອນກັນອາດຈະເຮັດໃຫ້ເກີດເຂດຮ້ອນເກີນໄປ (hot spots) ທີ່ເຮັດໃຫ້ການໄຫຼລະເຫີຍເກີດຂື້ນໄວຂື້ນໃນຕຳແໜ່ງຕົວຢ່າງທີ່ກຳນົດ ເຊິ່ງຈະນຳໄປສູ່ຜົນໄດ້ຮັບທີ່ບໍ່ເໝືອນກັນທົ່ວທັງຊຸດຕົວຢ່າງທັງໝົດ. ການປັບຄ່າຄວາມຖືກຕ້ອງ (calibration) ແລະ ການບໍາລຸງຮັກສາລະບົບຝາປິດທີ່ຖືກໃຫ້ຄວາມຮ້ອນຢ່າງເປັນປະຈຳຈະຮັບປະກັນການປະຕິບັດງານທີ່ດີທີ່ສຸດ ແລະ ການປ້ອງກັນຕົວຢ່າງທີ່ເໝືອນກັນທົ່ວທັງໝົດ.

ການປັບອັດຕາການເລີ່ມເຄື່ອນ (Ramping Rate) ແລະ ເວລາທີ່ຄົງທີ່ (Hold Time)

ການປັບປຸງອັດຕາການປ່ຽນແປງອຸນຫະພູມລະຫວ່າງຂັ້ນຕອນການເຄື່ອນທີ່ຂອງວຟິວ (cycling phases) ສາມາດຫຼຸດຜ່ອນຄວາມເຄັ່ງຕຶງຈາກການໄຫຼເຫີຍຂອງເນື້ອໃນທໍ່ PCR ໄດ້ຢ່າງມີນັກ. ການປ່ຽນອຸນຫະພູມຢ່າງຊ້າໆຈະຊ່ວຍໃຫ້ຄວາມຮ້ອນແຈກຢາຍຢ່າງສອດຄ່ອງກວ່າ ແລະ ຫຼຸດຜ່ອນຄວາມເຄັ່ງຕຶງຈາກການປ່ຽນແປງອຸນຫະພູມຢ່າງຮຸນແຮງ (thermal shock) ທີ່ອາດຈະເຮັດໃຫ້ຄວາມເຂັ້ມແຂງຂອງການປິດຜາກ (sealing integrity) ຖືກເສຍຫາຍ.

ຄວາມຖືກຕ້ອງຂອງການປັບຄ່າອຸນຫະພູມຂອງບັອກ (block temperature calibration accuracy) ມີຜົນກະທົບໂດຍກົງຕໍ່ການຄວບຄຸມການໄຫຼເຫີຍ ເນື່ອງຈາກການເກີນຄ່າອຸນຫະພູມ (temperature overshoots) ໃນຂະນະທີ່ປ່ຽນອຸນຫະພູມອາດເຮັດໃຫ້ເກີດການສູນເສຍຕົວຢ່າງຢ່າງບໍ່ຄາດຄິດ. ອຸປະກອນວິເຄື່ອນອຸນຫະພູມທີ່ທັນສະໄໝ (modern thermal cyclers) ມີອັລກົຣິດີມທີ່ຄາດການໄດ້ (predictive algorithms) ທີ່ພິຈາລະນາມວນລະການທີ່ມີຄວາມຮ້ອນ (thermal mass) ແລະ ລັກສະນະການຖ່າຍເທີມຄວາມຮ້ອນ (heat transfer characteristics) ຂອງວັດສະດຸທີ່ໃຊ້ເຮັດທໍ່ PCR ຕ່າງໆ ເຊິ່ງຊ່ວຍໃຫ້ການຄວບຄຸມອຸນຫະພູມມີຄວາມຖືກຕ້ອງຫຼາຍຂຶ້ນ ແລະ ຫຼຸດຜ່ອນຄວາມສ່ຽງຈາກການໄຫຼເຫີຍ.

ການກຽມຕົວຢ່າງ ແລະ ການພິຈາລະນາປະລິມານ

ປະລິມານເລີ່ມຕົ້ນທີ່ເໝາະສົມ

ການກຳນົດປະລິມານຕົ້ນສະບັບທີ່ເໝາະສົມສຳລັບທໍ່ PCR ຕ້ອງໃຊ້ການຖ່ວງດຸນລະຫວ່າງຄວາມຕ້ານທານຕໍ່ການໄຫຼຫາຍຂອງຂອງเหลວ ແລະ ຄວາມເປັນເອກະສານຂອງເຄື່ອງມື ແລະ ປະສິດທິພາບຂອງການເຮັດວຽກຂອງວຟິວ (thermal cycling). ປະລິມານເລີ່ມຕົ້ນທີ່ໃຫຍ່ຂຶ້ນຈະໃຫ້ຄວາມສາມາດໃນການປ້ອງກັນການໄຫຼຫາຍຂອງຂອງເຫຼວໄດ້ດີຂຶ້ນ ແຕ່ອາດຈະເຮັດໃຫ້ປະສິດທິພາບຂອງການຖ່າຍໂອນຄວາມຮ້ອນລົງ ແລະ ເພີ່ມຕົ້ນຄ່າໃຊ້ຈ່າຍຂອງເຄື່ອງມື. ສ່ວນຫຼາຍຂອງການນຳໃຊ້ PCR ທີ່ມາດຕະຖານຈະໄດ້ຮັບປະໂຫຍດຈາກປະລິມານເລີ່ມຕົ້ນທີ່ 20-50 μL ເຊິ່ງໃຫ້ຄວາມຕ້ານທານຕໍ່ການໄຫຼຫາຍຂອງຂອງເຫຼວຢູ່ໃນລະດັບທີ່ເໝາະສົມ ແລະ ຮັກສາປະສິດທິພາບຂອງການເຮັດວຽກຂອງວຟິວ (thermal cycling kinetics) ໃຫ້ຢູ່ໃນລະດັບທີ່ດີທີ່ສຸດ.

ອັດຕາສ່ວນລະຫວ່າງປະລິມານຕໍ່ເນື້ອທີ່ຜິວໜ້າໃນທໍ່ PCR ມີຜົນຕໍ່ອັດຕາການໄຫຼຫາຍຂອງຂອງເຫຼວ; ອັດຕາສ່ວນທີ່ຕ່ຳຈະເຮັດໃຫ້ຕົວຢ່າງຖືກສຳຜັດກັບແຮງໄຫຼຫາຍຫຼາຍຂຶ້ນ. ການອອກແບບທໍ່ທີ່ມີສ່ວນທ້າຍເປັນຮູບກົງ (conical-bottom) ຈະຫຼຸດຜ່ອນເນື້ອທີ່ຜິວໜ້າທີ່ສຳຜັດຕົວຢ່າງ ແລະ ຊ່ວຍໃຫ້ການດຶງເອົາຕົວຢ່າງທັງໝົດອອກມາໄດ້ຢ່າງສົມບູນ ແລະ ສະດວກຕໍ່ການປະສົມ. ການເຂົ້າໃຈຄວາມສຳພັນທາງເລຂາຄະນິດສາດເຫຼົ່ານີ້ຈະຊ່ວຍໃຫ້ນັກຄົ້ນຄວ້າເລືອກຮູບແບບ ແລະ ປະລິມານທໍ່ທີ່ເໝາະສົມຕໍ່ຄວາມຕ້ອງການທີ່ເປັນເອກະລັກຂອງການທົດລອງ.

ຄວາມສະຖຽນຂອງເຄື່ອງມື ແລະ ລະບົບບັຟເຟີ

ປະກອບຂອງບັຟເຟີສົ່ງຜົນຕໍ່ຄວາມໄວ້ຕໍ່ການລະເຫີຍນໃນທໍ່ PCR ຢ່າງມີນ້ຳໜັກ, ໂດຍເກືອບ່ອນໆ ແລະ ຕົວຢືນຕົວຢູ່ທີ່ຊ່ວຍຮັກສາຄວາມສະຖຽນຈະຫຼຸດຜ່ອນຄວາມດັນຂອງໄອນ້ຳ ແລະ ປັບປຸງການຮັກສາຕົວຢ່າງ. ການເພີ່ມກາເລໂຣລ໌ໃນຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ 5-10% ສາມາດຫຼຸດຜ່ອນອັດຕາການລະເຫີຍນໄດ້ຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໂດຍບໍ່ຮີ້ນຮາງຕໍ່ກິດຈະກຳຂອງ polymerase ຫຼືປະສິດທິພາບຂອງການຈຳລອງ. ການປັບປຸງເຫຼົ່ານີ້ເປັນທີ່ມີຄຸນຄ່າເປັນພິເສດສຳລັບເທື່ອການຈຳລອງທີ່ຍາວນານ ຫຼື ການນຳໃຊ້ທີ່ຕ້ອງການອຸນຫະພູມການແຕກຕົວທີ່ສູງຂຶ້ນ.

ຕົວຢືນຕົວຢູ່ທີ່ເປັນໂປຼຕີນ ແລະ ຕົວກະຕຸ້ນການເຕັມເຕີມ (crowding agents) ໃນສ່ວນປະສົມ PCR ສ້າງສິ່ງແວດລ້ອມທາງໂມເລກຸນທີ່ຕ້ານການປ່ຽນແປງປະລິມານເນື່ອງຈາກການລະເຫີຍນ. ຕົວເພີ່ມເຫຼົ່ານີ້ເຮັດວຽກດ້ວຍການເພີ່ມຄວາມໜືດຂອງວິທີການແລະຫຼຸດຜ່ອນກິດຈະກຳຂອງນ້ຳ, ເຊິ່ງເຮັດໃຫ້ເກີດເປັນເຄືອຂ່າຍປ້ອງກັນທີ່ປອດໄພອ້ອມໆ ສ່ວນປະກອບທີ່ສຳຄັນຂອງການປະຕິກິລິຍາ. ການປັບຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງລະບົບການຢືນຕົວເຫຼົ່ານີ້ຢ່າງລະມັດລະວັງຈະຮັບປະກັນຄວາມເຂົ້າກັນໄດ້ກັບວິທີການວິເຄາະຕໍ່ມາ ໃນຂະນະທີ່ຍັງໃຫ້ການປ້ອງກັນການລະເຫີຍນທີ່ເຂັ້ມແຂງ.

ການເກັບຮັກສາ ແລະ ການຈັດການຕາມມາດຕະຖານທີ່ດີທີ່ສຸດ

ຂະບວນການເກັບຮັກສາກ່ອນການຈຳລອງ

ການເກັບຮັກສາທໍ່ PCR ທີ່ໄດ້ຈັດຕັ້ງແລ້ວຢ່າງຖືກຕ້ອງກ່ອນຂະບວນການຄວາມຮ້ອນ (thermal cycling) ຈະຊ່ວຍປ້ອງກັນການລະເຫີຍນລ່ວງໆ ແລະ ຮັກສາຄວາມບໍລິສຸດຂອງຕົວຢ່າງໄວ້. ການເກັບຮັກສາໃນຕູ້ເຢັນທີ່ອຸນຫະພູມ 4°C ຈະຊ່ວຍຫຼຸດຄວາມດັນຂອງໄອ (vapor pressure) ແລະ ອັດຕາການລະເຫີຍນ ໃນເວລາທີ່ຍັງຮັກສາກິດຈະກຳຂອງເອນໄຊມ໌ (enzyme activity) ແລະ ປ້ອງກັນການປົນເປືືອນ. ອຸປະກອນເກັບຮັກສາຄວນປ້ອງກັນຕົວຢ່າງຈາກການສຳຜັດກັບແສງ ແລະ ຮັກສາລະດັບຄວາມຊື້ນໃຫ້ຄົງທີ່ ເພື່ອປ້ອງກັນການກໍ່ຕົວຂອງນ້ຳຄ້າງ (condensation) ໃນພາກນອກຂອງທໍ່.

ຂະບວນການຂົນສົ່ງທໍ່ PCR ຈາກເຂດການຈັດຕັ້ງໄປຍັງເຂດການຄວາມຮ້ອນ ຕ້ອງຄຳນຶງເຖິງການປ່ຽນແປງຂອງອຸນຫະພູມ ແລະ ຄວາມເຄັ່ງຕຶງທາງກາຍພາບ (mechanical stress) ທີ່ອາດຈະເຮັດໃຫ້ຄວາມເຂັ້ມແຂງຂອງການປິດທັບ (sealing integrity) ຖືກທຳລາຍ. ອຸປະກອນຂົນສົ່ງທີ່ມີຄຸນສົມບັດກັນຄວາມຮ້ອນ (insulated carriers) ແລະ ວັດຖຸທີ່ຊ່ວຍດູດຊຶມການສັ່ນ (shock-absorbing materials) ຈະປ້ອງກັນຕົວຢ່າງໃນເວລາຈັດການ ແລະ ຮັກສາສະພາບການເກັບຮັກສາໃຫ້ຄົງທີ່. ການບັນທຶກເວລາ ແລະ ສະພາບການເກັບຮັກສາຈະຊ່ວຍໃຫ້ການຄວບຄຸມຄຸນນະພາບ (quality control tracking) ແລະ ການວິເຄາະບັນຫາທີ່ເກີດຈາກການລະເຫີຍນ.

ການຈັດການຕົວຢ່າງຫຼັງຈາກຂະບວນການຄວາມຮ້ອນ

ການເຢັນແລະຄວບຄຸມອຸນຫະພູມຂອງທໍ່ PCR ເປັນທັນທີຫຼັງຈາກການເຮັດວຽກດ້ວຍວິທີການໄຮ້ເຄື່ອງຈັກ (thermal cycling) ຈະຊ່ວຍປ້ອງກັນການລະເຫີຍນຕໍ່ໄປ ແລະຮັກສາຜະລິດຕະພັນທີ່ຖືກເພີ່ມຈຳນວນ (amplification products) ເພື່ອການວິເຄາະ. ວິທີການເຢັນຢ່າງໄວວາດ້ວຍບ່ອນເຢັນທີ່ມີອຸນຫະພູມຕ່ຳ ຫຼື ການເກັບຮັກສາໃນຕູ້ເຢັນຈະຊ່ວຍຮັກສາຄວາມເປັນຢູ່ທີ່ດີຂອງຕົວຢ່າງ ແລະປ້ອງກັນການເສື່ອມສະພາບຈາກອຸນຫະພູມຂອງຜະລິດຕະພັນທີ່ເກີດຈາກປະຕິກິລິຍາ. ວິທີການເຢັນທີ່ຖືກຕ້ອງຍັງຊ່ວຍໃຫ້ການວັດແທກປະລິມານທີ່ຖືກຕ້ອງ ແລະຂະບວນການຕໍ່ໄປທີ່ເຊື່ອມຕໍ່ກັນ.

ການເກັບຮັກສາຕົວຢ່າງ PCR ທີ່ສຳເລັດແລ້ວໃນໄລຍະຍາວ ຕ້ອງການສະພາບການທີ່ເປັນພິເສດເພື່ອປ້ອງກັນການລະເຫີຍນໃນໄລຍະເກັບຮັກສາທີ່ຍາວ. ລະບົບການເກັບຮັກສາທີ່ປິດຢ່າງດີ ຮ່ວມກັບວັດສະດຸດູດຊື້ນ (desiccant materials) ຈະຮັກສາລະດັບຄວາມຊື້ນໃຫ້ຄົງທີ່ ແລະປ້ອງກັນການແລກປ່ຽນຄວາມຊື້ນກັບສິ່ງແວດລ້ອມ. ວິທີການຮັກສາເຫຼົ່ານີ້ຈະຮັບປະກັນວ່າຕົວຢ່າງຈະຢູ່ໃນສະພາບທີ່ເໝາະສົມສຳລັບການວິເຄາະຊ້ຳ ຫຼື ສຳລັບການນຳໃຊ້ຕໍ່ໄປໃນຂະບວນການອື່ນໆ.

ວິທີການຄວບຄຸມຄຸນນະພາບ ແລະການຕິດຕາມ

ເຕັກນິກການຢືນຢັນປະລິມານ

ການຕິດຕາມປະລິມານຕົວຢ່າງໃນທໍ່ PCR ໂດຍປະກົດຕິທັງໝົດໃນໄລຍະຂະບວນການທົດລອງ ສະເໜີການຄົ້ນພົບບັນຫາການໄຫຼຫຼຸດ (evaporation) ແຕ່ເບື້ອງຕົ້ນ ແລະ ເປີດໂອກາດໃຫ້ດຳເນີນການປັບປຸງກ່ອນທີ່ຈະສູນເສຍຕົວຢ່າງທັງໝົດ. ເຕັກນິກການໃຊ້ປີປີດທີ່ມີຄວາມຖືກຕ້ອງ ແລະ ເຄື່ອງມືວັດແທກທີ່ຖືກຄຳນວນຄ່າແລ້ວ ສາມາດຮັບປະກັນການປະເມີນປະລິມານຢ່າງຖືກຕ້ອງໂດຍບໍ່ເກີດການປົນເປື້ອນຕົວຢ່າງ. ວິທີການກວດສອບດ້ວຍຕາ ໂດຍໃຊ້ທໍ່ທີ່ມີແບ່ງສ່ວນວັດແທກ ຫຼື ລະບົບວັດແທກດ້ວຍຈຸລັດສະກົດ ສະເໜີທາງເລືອກໃນການຕິດຕາມທີ່ບໍ່ເຂົ້າໄປຮີນຮາຍຕົວຢ່າງທີ່ອ່ອນໄຫວ.

ການວິເຄາະດ້ວຍນ້ຳໜັກ (Gravimetric analysis) ສະເໜີການວັດແທກການໄຫຼຫຼຸດທີ່ມີຄວາມຖືກຕ້ອງສູງ ໂດຍການຕິດຕາມການປ່ຽນແປງຂອງນ້ຳໜັກໃນທໍ່ PCR ໃນໄລຍະເກັບຮັກສາ ແລະ ການເຮັດວຽກດ້ວຍອຸນຫະພູມ. ເຄື່ອງຊົ່ວງວັດແທກທີ່ມີຄວາມຖືກຕ້ອງໃນລະດັບຕ່ຳກວ່າ 1 ມິລລີກຣາມ ສາມາດຮັບຮູ້ການສູນເສຍທີ່ເກີດຈາກການໄຫຼຫຼຸດທີ່ນ້ອຍທີ່ສຸດ ເຊິ່ງອາດຈະບໍ່ຖືກສັງເກດເຫັນໃນທົ່ວໄປ. ການວັດແທກເຊິ່ງເປັນປະລິມານນີ້ ຊ່ວຍສະໜັບສະໜູນການປັບປຸງເງື່ອນໄຂການເກັບຮັກສາ ແລະ ປັບຄ່າພາລາມິເຕີດ້ານອຸນຫະພູມໃຫ້ເໝາະສົມຕາມຄວາມຕ້ອງການຂອງການທົດລອງເປັນພິເສດ.

ໂປຣແທັກການກວດສອບປະສິດທິພາບ

ການຢືນຢັນຢ່າງເປັນລະບົບຕໍ່ວິທີການປ້ອງກັນການໄຫຼຫາຍຂອງຂອງແຫຼວຕ້ອງໃຊ້ການທົດສອບຢູ່ໃນສະພາບການທີ່ຄວບຄຸມໄດ້ ແລະ ມີມາດຕະຖານເດີມ ເຊິ່ງຈະເລີຍກັບຂະບວນການທົດສອບທີ່ຈັດຕັ້ງຂຶ້ນຈິງ. ມາດຕະຖານອ້າງອີງທີ່ໃຊ້ປະລິມານ ແລະ ປະກອບສ່ວນທີ່ຮູ້ຈັກດີ ສາມາດຊ່ວຍໃຫ້ການປະເມີນຜົນການປ້ອງກັນໄດ້ຢ່າງຖືກຕ້ອງ. ການສຶກສາທຽບທາງດ້ານຕ່າງໆລະຫວ່າງຍີ່ຫໍ້ຂອງທໍ່ PCR, ວິທີການປິດຜາກ, ແລະ ສະພາບການເກັບຮັກສາ ສາມາດໃຫ້ຂໍ້ມູນທີ່ມີຄຸນຄ່າສຳລັບການປັບປຸງຂະບວນການທຳງານໃນຫ້ອງທົດສອບ.

ການວິເຄາະທາງສະຖິຕິຕໍ່ຂໍ້ມູນການໄຫຼຫາຍຈາກການທົດສອບຫຼາຍໆຄັ້ງ ສາມາດຊ່ວຍເປີດເຜີຍແນວໂນ້ມ ແລະ ແຫຼ່ງທີ່ເກີດຄວາມປ່ຽນແປງ ເຊິ່ງອາດຈະເຮັດໃຫ້ຄວາມເຊື່ອຖືໃນຜົນໄດ້ຮັບຖືກເສຍຫາຍ. ເຕັກນິກການນຳໃຊ້ແຜ່ນຕິດຕາມ (control charting) ສາມາດຕິດຕາມປະສິດທິພາບການປ້ອງກັນການໄຫຼຫາຍໃນໄລຍະເວລາ ແລະ ຊ່ວຍຄົ້ນພົບການປ່ຽນແປງທີ່ເກີດຂຶ້ນຢ່າງເປັນລະບົບຕໍ່ປະສິດທິພາບຂອງວິທີການປ້ອງກັນ. ວິທີການຮັບປະກັນຄຸນນະພາບເຫຼົ່ານີ້ຈະຮັບປະກັນວ່າສະພາບການທົດສອບຈະຄົງທີ່ ແລະ ຜົນໄດ້ຮັບຈາກການເພີ່ມຈຳນວນ (amplification) ຈະເປັນທີ່ເຊື່ອຖືໄດ້.

ການແກ້ໄຂບັນຫາທີ່ເກີດຂຶ້ນເຖິງການໄຫຼຫາຍເປັນປົກກະຕິ

ການກຳນົດແຫຼ່ງທີ່ເກີດການໄຫຼຫາຍ

ການວິເຄາະບັນຫາຢ່າງລະບົບຕໍ່ບັນຫາການໄຫຼຂອງຕົວຢ່າງໃນທໍ່ PCR ເລີ່ມຕົ້ນດ້ວຍການກຳນົດເຖິງກົນໄກການສູນເສຍທີ່ສຳຄັນທີ່ສຸດ ທີ່ມີຜົນຕໍ່ເງື່ອນໄຂການທົດລອງທີ່ເຈາະຈົງ. ການບັນທຶກອຸນຫະພູມໃນເວລາທີ່ປ່ຽນອຸນຫະພູມ (thermal cycling) ສາມາດເປີດເຜີຍການປ່ຽນແປງອຸນຫະພູມທີ່ເກີດຂຶ້ນນອກຈາກຄວາມປົກກະຕິ ເຊິ່ງອາດເຮັດໃຫ້ເກີດການໄຫຼຂອງຕົວຢ່າງຫຼາຍເກີນໄປ. ການຕິດຕາມຄວາມຊື້ນໃນສະພາບແວດລ້ອມທີ່ໃຊ້ເກັບຮັກສາ ແລະ ສະພາບແວດລ້ອມທີ່ໃຊ້ໃນການປ່ຽນອຸນຫະພູມ ສາມາດຊ່ວຍກຳນົດປັດໄຈດ້ານສິ່ງແວດລ້ອມທີ່ອາດເຮັດໃຫ້ຕົວຢ່າງສູນເສຍໄດ້ໄວຂຶ້ນ.

ການກວດສອບດ້ວຍຕາເປີດຂອງທໍ່ PCR ແລະ ຝາປິດ ສາມາດເປີດເຜີຍບັນຫາທີ່ເກີດຈາກການຜະລິດ, ຄວາມເສຍຫາຍ ຫຼື ມືອນເປື້ອນ ທີ່ເຮັດໃຫ້ຄວາມສາມາດໃນການປິດຢ່າງໃຫ້ແນ່ນຂອງທໍ່ບົກບ່ອນ. ການກວດສອບດ້ວຍກ້ອງຈຸລັດສາດຂອງເນື້ອເທິງທີ່ໃຊ້ປິດ ສາມາດເປີດເຜີຍຮູບແບບຂອງການສຶກຫຼຸດ ຫຼື ສິ່ງເປື້ອນທີ່ເຂົ້າມາຂັດຂວາງການຕິດຕໍ່ຢ່າງເຕັມທີ່ລະຫວ່າງຝາປິດ ແລະ ທໍ່. ວິທີການວິເຄາະເຫຼົ່ານີ້ຊ່ວຍໃຫ້ສາມາດດຳເນີນການປັບປຸງທີ່ເປົ້າໝາຍໄດ້ຢ່າງເປັນສະເພາະ ແທນທີ່ຈະຕ້ອງປ່ຽນແປງຂະບວນການທັງໝົດ.

ຍຸດທະສາດໃນການດຳເນີນການປັບປຸງ

ການປະຕິບັດມາດຕະການປັບປຸງເພື່ອແກ້ໄຂບັນຫາການລະເຫີຍນ ຕ້ອງໃຊ້ການປະເມີນຢ່າງເປັນລະບົບຕໍ່ຕົວແປຫຼາຍໆ ປະເພດ ແລະ ການປະສານງານລະຫວ່າງເຫຼົ່າມັນ ໃນບົດທົດລອງທີ່ກຳນົດຢ່າງເຈາະຈົງ. ການປັບຄ່າ ແລະ ການບໍາຮັກສາອຸປະກອນ ຈະຊ່ວຍແກ້ໄຂບັນຫາດ້ານປະສິດທິພາບຂອງເຄື່ອງທີ່ໃຊ້ໃນການເຮັດ PCR (thermal cycler) ເຊິ່ງອາດເປັນສາເຫດໜຶ່ງທີ່ເຮັດໃຫ້ເກີດບັນຫາການລະເຫີຍນ. ການຄວບຄຸມສະພາບແວດລ້ອມ ເຊັ່ນ: ການປັບອຸນຫະພູມ, ຄວາມຊື້ນ, ແລະ ການປັບການຖ່າຍເທີ່າອາກາດ ຈະຊ່ວຍສ້າງສະພາບແວດລ້ອມທີ່ເສຖຽນກວ່າ ເພື່ອຮັກສາຕົວຢ່າງໃຫ້ດີຂຶ້ນ.

ການປັບປຸງບົດທົດລອງ ເຊັ່ນ: ການປັບປຸງປະລິມານ, ການເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງ buffer, ແລະ ການປັບເວລາ ສາມາດຫຼຸດຜ່ອນຄວາມອ່ອນໄຫວຕໍ່ການລະເຫີຍນໄດ້ຢ່າງມີນັກ ໂດຍບໍ່ເຮັດໃຫ້ປະສິດທິພາບຂອງການເພີ່ມຈຳນວນ (amplification) ລົດຖອຍ. ການແກ້ໄຂເຫຼົ່ານີ້ເປັນການເປົ້າໝາຍໄປທີ່ສາເຫດຕົ້ນຕໍ ມິໄດ້ເປັນພຽງການແກ້ໄຂອາການເທົ່ານັ້ນ, ເຊິ່ງຈະໃຫ້ວິທີແກ້ໄຂທີ່ຍືນຍົງ ເພື່ອໃຫ້ໄດ້ຜົນໄດ້ຮັບທີ່ສອດຄ່ອງກັນໃນການທົດລອງ. ການບັນທຶກບັນທຶກການແກ້ໄຂທີ່ສຳເລັດຈະຊ່ວຍສ້າງຄວາມຮູ້ທີ່ເປັນຂອງສະຖາບັນ ເພື່ອນຳໃຊ້ໃນການແກ້ໄຂບັນຫາໃນອະນາຄົດ.

ຄຳຖາມທີ່ຖາມບໍ່ຍາກ

ປະລິມານເລີ່ມຕົ້ນທີ່ເໝາະສົມສຳລັບທໍ່ PCR ເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນຄວາມສ່ຽງຈາກການລະເຫີຍນແມ່ນເທົ່າໃດ?

ປະລິມານເລີ່ມຕົ້ນທີ່ເໝາະສົມທີ່ສຸດສຳລັບທໍ່ PCR ມັກຈະຢູ່ໃນຊ່ວງ 20-50 μL, ເຊິ່ງໃຫ້ຄວາມສາມາດໃນການປ້ອງກັນການສູນເສຍຈາກການໄຫຼລະເຫີຍໄດ້ຢ່າງພໍເທົ່າທີ່ຈະເປັນໄປໄດ້ ແລະ ຍັງຮັກສາປະສິດທິພາບໃນການຖ່າຍເທີມພະລັງງານຄວາມຮ້ອນ ແລະ ການໃຊ້ວັດຖຸເຄມີຢ່າງເປັນປະຢັດຖິດ. ປະລິມານທີ່ໃຫຍ່ຂຶ້ນຈະໃຫ້ຄວາມຕ້ານທານຕໍ່ການໄຫຼລະເຫີຍດີຂຶ້ນ ແຕ່ອາດຈະສົ່ງຜົນເສຍຕໍ່ປະສິດທິພາບຂອງການເຄື່ອນທີ່ຄວາມຮ້ອນ (thermal cycling), ໃນຂະນະທີ່ປະລິມານທີ່ນ້ອຍລົງຈະເປີດໂອກາດໃຫ້ເກີດການປ່ຽນແປງຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຢ່າງມີນັກເນື່ອງຈາກການໄຫຼລະເຫີຍເພີຍງເລັກນ້ອຍ.

ອຸນຫະພູມຂອງຝາປິດທີ່ຖືກເຮັດໃຫ້ຮ້ອນມີຜົນຕໍ່ການປ້ອງກັນການໄຫຼລະເຫີຍໃນທໍ່ PCR ແນວໃດ

ຝາປິດທີ່ຖືກເຮັດໃຫ້ຮ້ອນຄວນຮັກສາອຸນຫະພູມໃຫ້ສູງກວ່າອຸນຫະພູມສູງສຸດໃນຂະນະທີ່ເຄື່ອນທີ່ຄວາມຮ້ອນ 5-10°C ເພື່ອປ້ອງກັນການກໍ່ຕົວຂອງນ້ຳຄ້າງ (condensation) ແລະ ການໄຫຼລະເຫີຍໄດ້ຢ່າງມີປະສິດທິຜົນ. ຄວາມແຕກຕ່າງຂອງອຸນຫະພູມນີ້ຈະສ້າງເປັນອຸປະກອນກັ້ນຄວາມຮ້ອນທີ່ຊ່ວຍຫຼຸດຜ່ອນການກໍ່ຕົວຂອງໄອນ້ຳ ແລະ ປ້ອງກັນການກໍ່ຕົວຂອງນ້ຳຄ້າງໃນສ່ວນຝາປິດຂອງທໍ່, ເຊິ່ງຖ້າບໍ່ມີການປ້ອງກັນອາດຈະເຮັດໃຫ້ຕົວຢ່າງຖືກເຈືອຈາງ ຫຼື ເກີດການປົນເປື້ອນຂ້າມລະຫວ່າງທໍ່ PCR.

ການປ່ຽນແປງປະກອບຂອງບັຟເຟີ (buffer) ສາມາດຊ່ວຍຫຼຸດຜ່ອນການໄຫຼລະເຫີຍໃນການປະຕິກິລິຍາ PCR ໄດ້ຫຼືບໍ່

ແມ່ນແລ້ວ, ການປ່ຽນແປງບັຟເຟີເຊິ່ງລວມທັງການເພີ່ມກາເລີໂຣນໃນຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ 5-10% ສາມາດຫຼຸດຜ່ອນອັດຕາການໄຫຼລະເຫີຍໄດ້ຢ່າງມີນັກສຳຄັນໂດຍບໍ່ຮີ້ນຂັດກິດຈະກຳຂອງ polymerase. ຕົວຢືນຕົວປະກອບຂອງປະຕິກິລິຍາທາງຊີວະເคมີ (Protein stabilizers) ແລະ ຕົວກະຕຸ້ນທີ່ເຮັດໃຫ້ມີຄວາມໜາແໜ້ນຂອງໂມເລກຸນ (crowding agents) ຍັງສ້າງສະພາບແວດລ້ອມທາງໂມເລກຸນທີ່ຕ້ານການປ່ຽນແປງປະລິມານ, ໂດຍໃຫ້ການປ້ອງກັນເພີ່ມເຕີມຕໍ່ການປ່ຽນແປງຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ເກີດຈາກການໄຫຼລະເຫີຍໃນເວລາທີ່ເຮັດວິທີການ thermal cycling.

ວິທີການປິດຜາສະຫຼຸບທີ່ມີປະສິດທິພາບທີ່ສຸດເພື່ອປ້ອງກັນການໄຫຼລະເຫີຍໃນທໍ່ PCR ແມ່ນຫຍັງ?

ວິທີການປິດຜາສະຫຼຸບທີ່ມີປະສິດທິພາບທີ່ສຸດແມ່ນການປະສົມປະສານລະຫວ່າງຝາປິດທີ່ມີຄຸນນະພາບສູງກັບເສັ້ນເກີດທີ່ຖືກຂຶ້ນຮູບຢ່າງຖືກຕ້ອງ, ວິທີການຕິດຕັ້ງທີ່ເໝາະສົມ, ແລະ ຄວາມກົດດັນທີ່ຖືກຕ້ອງຈາກຝາປິດທີ່ຖືກເຮັດໃຫ້ຮ້ອນ. ວິທີການທາງເລືອກອື່ນໆ ເຊັ່ນ: ຟີມທີ່ໃຊ້ປິດຜາສະຫຼຸບດ້ວຍກາວ ແລະ ແຜ່ນປິດຜາສະຫຼຸບທີ່ເຮັດຈາກຊີລິໂຄນ (silicone sealing mats) ສາມາດໃຫ້ການປ້ອງກັນການໄຫຼລະເຫີຍໄດ້ຢ່າງດີເລີດສຳລັບການນຳໃຊ້ທີ່ເປັນເລື່ອງເພີ່ມເຕີມ, ໂດຍປະສິດທິຜົນຂຶ້ນກັບຄວາມຕ້ອງການຂອງວິທີການ thermal cycling ແລະ ວິທີການຈັດການຕົວຢ່າງ.